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zhongnan1991

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by polypro at 2014-07-23 09:00:49
两个蛋白的等电点差别如何,如果有一定差别,可尝试等电点超离

嗯~  那一个蛋白如果文献上查不到它的等电点,我该如果确定它的等电点,有简便的方法吗?
我发如华,是念何年;夜晴如镜,郎心似铁。
11楼2014-07-23 16:55:07
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zhongnan1991

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by elise1987 at 2014-07-23 11:32:24
首先排除一下透析袋的问题,重金属残会引起变性沉淀。其次,蛋白质本身性质,清蛋白溶解性好。优球蛋白不溶于水。拟球蛋白可溶。你需要搞清楚你的蛋白溶于什么溶剂。然后用这个溶剂做透析液就可以了。
...

我今天分别用10KD  30KD  50KD的超滤管(8000rpm   10min)离完之后跑电泳,结果:所有的管子所有的蛋白都漏下来了。 太疑惑了~~  40KD的从10KD的超滤管漏的很彻底,和没超滤管的原液比SDS-PAGE条带一点儿都不淡
我发如华,是念何年;夜晴如镜,郎心似铁。
12楼2014-07-23 22:15:40
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

用30KD截留量的超滤浓缩管或者超滤浓缩膜就可以啊,反复几次,基本能去除,加入杂蛋白和你的蛋白间没有相互作用。这个方法比较简单。也可考虑用SUPERDEX75柱子,但我感觉超滤的方式更快捷,蛋白浓度还不会被稀释。
13楼2014-07-23 22:32:40
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhongnan1991: 金币+5 2014-11-03 21:52:51
引用回帖:
12楼: Originally posted by zhongnan1991 at 2014-07-23 22:15:40
我今天分别用10KD  30KD  50KD的超滤管(8000rpm   10min)离完之后跑电泳,结果:所有的管子所有的蛋白都漏下来了。 太疑惑了~~  40KD的从10KD的超滤管漏的很彻底,和没超滤管的原液比SDS-PAGE条带一点儿 ...

肯定是你的超滤管漏了,另外确认下你的转速有没有太高。注意,如果是新的超滤管,用前至少在ddH2O或者20%的乙醇里浸泡半小时,千万不要新管子拿过来直接用。这个办法原理上是没问题的。
14楼2014-07-23 22:36:41
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elise1987

金虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by zhongnan1991 at 2014-07-24 02:15:40
我今天分别用10KD  30KD  50KD的超滤管(8000rpm   10min)离完之后跑电泳,结果:所有的管子所有的蛋白都漏下来了。 太疑惑了~~  40KD的从10KD的超滤管漏的很彻底,和没超滤管的原液比SDS-PAGE条带一点儿 ...

不应该啊,超滤管质量没问题的吧?一般来说选择截留分子量为样品一半的膜是不会漏,至少不会全漏。楼主可以考虑一下中空纤维过滤或者膜包。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
不折腾,不胡闹,珍惜时间和生命
15楼2014-07-23 22:42:30
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polypro

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by zhongnan1991 at 2014-07-23 16:55:07
嗯~  那一个蛋白如果文献上查不到它的等电点,我该如果确定它的等电点,有简便的方法吗?...

有序列的话可自接算出来,有结构更准确
否则可测一条酸碱滴定曲线可测定等电点
泉涸,鱼相与处于陆,相呴以湿,相濡以沫,不如相忘于江湖。
16楼2014-07-24 08:22:10
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白话八股

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

用30KD的超虑管?可以吧?

[ 发自小木虫客户端 ]
最爱的那个人会出现在身边。
17楼2014-07-24 08:32:52
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