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zhongnan1991

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质的分离已有6人参与

小弟最近最做一个蛋白(一种酶)的纯化实验,目标蛋白的分子量约40KD,主要杂蛋白的分子量约为15KD,不知道用什么方法分离。
不知道透析能不能行?如果可行应该选孔径多大的透析袋?用超滤管可行吗? 还有过柱子怎么样?
希望能够得到有这方面经验的师兄师姐或者老师的指点,万分期待,不胜感激!

[ Last edited by silicare on 2014-7-18 at 10:53 ]
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我发如华,是念何年;夜晴如镜,郎心似铁。
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhongnan1991: 金币+5 2014-11-03 21:52:51
引用回帖:
12楼: Originally posted by zhongnan1991 at 2014-07-23 22:15:40
我今天分别用10KD  30KD  50KD的超滤管(8000rpm   10min)离完之后跑电泳,结果:所有的管子所有的蛋白都漏下来了。 太疑惑了~~  40KD的从10KD的超滤管漏的很彻底,和没超滤管的原液比SDS-PAGE条带一点儿 ...

肯定是你的超滤管漏了,另外确认下你的转速有没有太高。注意,如果是新的超滤管,用前至少在ddH2O或者20%的乙醇里浸泡半小时,千万不要新管子拿过来直接用。这个办法原理上是没问题的。
14楼2014-07-23 22:36:41
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖,欢迎常来生物科学版发帖! 2014-07-18 14:16:00
你的目标蛋白带不带标签,比如若带His标签的话,过一下HIs柱不就可以了吗
2楼2014-07-18 10:28:06
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elise1987

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
透析肯定是可行,透析袋25KD分子量的。超滤也可以,分子量控制在20KD以下,不然会漏。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
不折腾,不胡闹,珍惜时间和生命
3楼2014-07-18 15:35:17
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zhongnan1991

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-18 10:28:06
你的目标蛋白带不带标签,比如若带His标签的话,过一下HIs柱不就可以了吗

这个蛋白是从植物中提取的天然蛋白,不是经过改造加工的。我还没试,不过感觉带HIS标签的概率不大吧?
我发如华,是念何年;夜晴如镜,郎心似铁。
4楼2014-07-23 08:18:16
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