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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白质的分离
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zhongnan1991

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质的分离 已有6人参与

小弟最近最做一个蛋白（一种酶）的纯化实验，目标蛋白的分子量约40KD，主要杂蛋白的分子量约为15KD,不知道用什么方法分离。
不知道透析能不能行？如果可行应该选孔径多大的透析袋？用超滤管可行吗？ 还有过柱子怎么样？
希望能够得到有这方面经验的师兄师姐或者老师的指点，万分期待，不胜感激！

[ Last edited by silicare on 2014-7-18 at 10:53 ]
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我发如华，是念何年；夜晴如镜，郎心似铁。
1楼 2014-07-18 10:24:41
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

用30KD截留量的超滤浓缩管或者超滤浓缩膜就可以啊，反复几次，基本能去除，加入杂蛋白和你的蛋白间没有相互作用。这个方法比较简单。也可考虑用SUPERDEX75柱子，但我感觉超滤的方式更快捷，蛋白浓度还不会被稀释。
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13楼2014-07-23 22:32:40
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖，欢迎常来生物科学版发帖！ 2014-07-18 14:16:00
你的目标蛋白带不带标签，比如若带His标签的话，过一下HIs柱不就可以了吗
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2楼2014-07-18 10:28:06
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elise1987

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
透析肯定是可行，透析袋25KD分子量的。超滤也可以，分子量控制在20KD以下，不然会漏。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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不折腾，不胡闹，珍惜时间和生命
3楼2014-07-18 15:35:17
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zhongnan1991

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-18 10:28:06
你的目标蛋白带不带标签，比如若带His标签的话，过一下HIs柱不就可以了吗

这个蛋白是从植物中提取的天然蛋白，不是经过改造加工的。我还没试，不过感觉带HIS标签的概率不大吧？
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我发如华，是念何年；夜晴如镜，郎心似铁。
4楼2014-07-23 08:18:16
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