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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » DNA marker 前端条带模糊，求解决办法。
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向

[求助] DNA marker 前端条带模糊，求解决办法。 已有5人参与

不知道为什么我的DNA marker 前端条带模糊，我分析可能有以下几个原因，又一一排除了：
1.1×TAE电泳液时间过长，我换了电泳液，不行；
2.EB染色液的问题，重新配制了，还是不行；
3.夏天气温高，条带扩散快，我就这冰浴中跑电泳，还是不行。
4.琼脂糖胶配的很均匀，没有问题。
请各位高手不吝指教，多谢多谢！
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    • 2014-07-16 22:09:54, 1.25 M

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1楼 2014-07-16 22:11:05
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biolinker

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
289363400: 金币+1, ★有帮助, 谢谢！ 2014-07-17 11:59:04
那您有没有找另外一个Marker进行比对？还有电泳的时间和电压有没有考虑？
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2楼2014-07-17 09:26:19
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向
引用回帖:
2楼: Originally posted by biolinker at 2014-07-17 09:26:19
那您有没有找另外一个Marker进行比对？还有电泳的时间和电压有没有考虑？

多谢！应该不是marker的问题，marker后来换过新的，还是不行。电泳电压在5-10V/cm之间，算不上高。电泳时间也不长，10-20min。都是这个样子。前一段时间还好好的，不知道现在为什么100b.p和200bp的条带就分不开了。
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3楼2014-07-17 11:58:40
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biolinker

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 289363400 at 2014-07-17 11:58:40
多谢！应该不是marker的问题，marker后来换过新的，还是不行。电泳电压在5-10V/cm之间，算不上高。电泳时间也不长，10-20min。都是这个样子。前一段时间还好好的，不知道现在为什么100b.p和200bp的条带就分不开了。...

那我就不是很清楚了，所有问题都考虑了，其他的真不知道哪里出问题了。不能帮到您了，不好意思。
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4楼2014-07-17 12:09:26
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
289363400: 金币+1, ★有帮助 2014-07-17 17:27:07
1、胶做的不错，排除胶的问题，缓冲液什么的其他的也肯定是没有问题了，电压应该影响不大
2、EB染色没有问题
3、问题可能出在marker上，有污染或者降解，不过问题也不大，因为条带还是看得见的
4、想跑开点的话就适当延长跑胶时间，个人感觉是你的胶跑的时间太短了
建议下次试试其他的marker，同时跑胶时间适当延长，希望对你有帮助
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
5楼2014-07-17 12:17:59
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
289363400: 金币+1, ★有帮助 2014-07-17 17:26:18
小分子量DNA容易扩散，当然是弥散的。
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6楼2014-07-17 16:26:08
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向
引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-07-17 16:26:08
小分子量DNA容易扩散，当然是弥散的。

之前有段时间还好好的，不知道最近这是怎么了，前端就分不开了。
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7楼2014-07-17 17:26:52
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向
引用回帖:
5楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-07-17 12:17:59
1、胶做的不错，排除胶的问题，缓冲液什么的其他的也肯定是没有问题了，电压应该影响不大
2、EB染色没有问题
3、问题可能出在marker上，有污染或者降解，不过问题也不大，因为条带还是看得见的
4、想跑开点的话就 ...

我试过长时间跑胶，结果是前端弥散更为严重。或许真的是marker的问题了。
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8楼2014-07-17 17:31:20
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皇猪

木虫 (正式写手)
marker加多少微升呀，适当加大marker剂量试试！！！！
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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别
9楼2014-07-18 08:20:54
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Agarose胶浓度是多少？用1.5%的胶试试看。
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10楼2014-07-18 08:31:55
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