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caca214

银虫 (小有名气)

[求助] WB结果和预期条带不符正常吗?我的抗体能用吗? 已有2人参与

各位高手,我买了两支抗体,一个目的条带是86kd,一个是49kd。杂同一个样品蛋白,结果杂出来是图1的结果(左图是86的,右图是49的)。

图1(样品DAOY细胞 总蛋白,marker参见图2)
然后,我又重做了一次,这次用不同细胞系总蛋白做(含第一次样品),杂的是49kd的那个抗体,得图2.

抗体浓度1:500
然后我用一抗洗脱液洗掉一抗得图3说明一抗的确洗掉了

图3 然后再杂86kd的抗体图4

请大家帮分析下,抗体能用不?
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tsyxy421

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
抗体是单克隆还是多克隆?
沉稳扎实,勤奋刻苦。
2楼2014-07-11 14:43:25
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nrahouston

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的目的蛋白有多大?如果你的目的蛋白是86kd,那就用第一个;反之就是第二个抗体。都不是,就都不能用。
当然,你要考虑你的目的蛋白有没有isoforms?或被剪切的产物?
这两个抗体识别的位点是否相同?识别位点是否可能被修饰?
3楼2014-07-12 07:01:38
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