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cong葱

铜虫 (小有名气)

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[求助] 质粒保存已有3人参与

虫虫们质粒要怎么保存呢借来的质粒很不容易很怕保存失活了有谁可以指点一下吗在此先谢谢各位高人了

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1楼 2014-07-09 11:32:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

leonaliu2013

木虫 (著名写手)

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cong葱(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-11 11:12:47

引用回帖:

10楼: Originally posted by cong葱 at 2014-07-10 15:35:57
嗯谢谢亲我还想知道下要是转到大肠杆菌中的话还需要知道这个质粒的什么信息除了抗性还有什么？
现在质粒我在-20保存因为不知道接下来怎么做这样质粒会有问题吗？...

在-20度放着应该是不会有太大的问题。但是是这样的，首先你的质粒是别人给你的，你无法确定他给你的这个质粒的质量是好是坏。我上次向别人要了一个质粒，拿到之后发现，转化到大肠杆菌和我的宿主菌中都不长。也就是说质粒本身可能有问题。还有一次，别人给我的质粒，我转化之后，提质粒然后做了酶切，发现大小根本不是我要的质粒，后来联系她，她说给我错了。其实你往大肠杆菌里面转或者往农杆菌里面转都行，但是要做个转化，然后再大量的提取一下，进行酶切验证。不然你无法确定她给你的质粒对不对。如果她给你的质粒量很大，比如50微升，那么你可以不用转化，-20度保存就可以了。但是如果量不大，你不仅要往目标菌里面转，而且还要做酶切，一旦失败一次，这个质粒就越来越少，用完了怎么办？毕竟是人家给的。这个质粒的信息你可以到网上查文献，看看是否有，也可以向给你质粒的人要，至少你要知道这个质粒有多大，有哪些酶切位点，从而用来验证这个质粒是否是你需要的那个。