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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 质谱分析 » 求解质谱出现两个峰，但是分子量相同的原因
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bingling866

新虫 (初入文坛)

[求助] 求解质谱出现两个峰，但是分子量相同的原因 已有3人参与

这两天做了个单抗蛋白质的质谱分子量的分析，但是有点异常情况不能解释，烦请各位坛友帮助一下。
      在液质联用中，214nm的不同保留时间出现两个峰，质谱分析这两个峰的分子量相同；而且此样品经过N-糖苷酶切后，后一个峰更加明显了，而且分子量也是相同的，上图，求解释。
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    • 2014-07-08 09:42:09, 839 K

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1楼 2014-07-08 09:43:01
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不是很懂，个人感觉，是不是因为中性丢失，可以做做QQQ的中性丢失。另外液相中两个峰可能是异构体。
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2楼2014-07-08 14:08:40
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Dionysius

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先想问一下你用的什么柱子？
另外你的峰拖尾的很厉害，所以在后一个峰中很可能包含有你的单抗分子。你的第二个峰（酶切前和酶切后）都有明显的杂蛋白峰，在酶切之后更明显。第二个峰可能就是因为这些杂蛋白引起的。
最后比较好奇，为什么你的单抗经N-糖苷酶切，在去卷积化之后还有这么多峰？
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3楼2014-07-08 22:48:15
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的前一个峰拖尾如此严重，第二个峰的质谱图会不会主要是第一个拖尾峰的碎片？
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快乐不需要走遍天涯去寻找，只需播一粒种子在脚下。
4楼2014-07-09 08:46:40
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bingling866

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Dionysius at 2014-07-08 22:48:15
首先想问一下你用的什么柱子？
另外你的峰拖尾的很厉害，所以在后一个峰中很可能包含有你的单抗分子。你的第二个峰（酶切前和酶切后）都有明显的杂蛋白峰，在酶切之后更明显。第二个峰可能就是因为这些杂蛋白引起的 ...

用的是安捷伦的一个1000埃的反相柱，这难道是因为我的蛋白不纯？可是分子筛并没有这么多峰啊？还有什么方法能确切的确定一下我的样品纯度？酶切之后的峰基本上和我酶切之前的是对应的，只能说我酶切之前为什么会有那么多峰呢？是因为糖基化不完全，还是别的结构的物质？谢谢！
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5楼2014-07-09 13:14:45
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bingling866

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wyy080214 at 2014-07-08 14:08:40
不是很懂，个人感觉，是不是因为中性丢失，可以做做QQQ的中性丢失。另外液相中两个峰可能是异构体。

蛋白制品的异构体？有什么方法来确定一下是不是异构体呢？
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6楼2014-07-09 13:16:50
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bingling866

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kf1009 at 2014-07-09 08:46:40
你的前一个峰拖尾如此严重，第二个峰的质谱图会不会主要是第一个拖尾峰的碎片？

怎么能知道是不是碎片？看二级质谱吗？
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7楼2014-07-09 13:18:17
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Dionysius

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bingling866 at 2014-07-09 13:14:45
用的是安捷伦的一个1000埃的反相柱，这难道是因为我的蛋白不纯？可是分子筛并没有这么多峰啊？还有什么方法能确切的确定一下我的样品纯度？酶切之后的峰基本上和我酶切之前的是对应的，只能说我酶切之前为什么会有 ...

1. 你的峰拖尾太严重了，你可以优化一下液相条件，将两个峰分开，这样更好判断是什么原因造成了两个峰。是蛋白的不同的构象还是其他杂质
2. 单抗分子量的异质性主要是不同的糖基化造成了，而你的样品切掉N-糖修饰之后，分子量的异质性基本没变，真的很奇怪
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8楼2014-07-09 23:15:55
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