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bingling866

新虫 (初入文坛)

[求助] 求解质谱出现两个峰,但是分子量相同的原因 已有3人参与

这两天做了个单抗蛋白质的质谱分子量的分析,但是有点异常情况不能解释,烦请各位坛友帮助一下。
      在液质联用中,214nm的不同保留时间出现两个峰,质谱分析这两个峰的分子量相同;而且此样品经过N-糖苷酶切后,后一个峰更加明显了,而且分子量也是相同的,上图,求解释。
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  • 2014-07-08 09:42:09, 839 K

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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不是很懂,个人感觉,是不是因为中性丢失,可以做做QQQ的中性丢失。另外液相中两个峰可能是异构体。
2楼2014-07-08 14:08:40
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Dionysius

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先想问一下你用的什么柱子?
另外你的峰拖尾的很厉害,所以在后一个峰中很可能包含有你的单抗分子。你的第二个峰(酶切前和酶切后)都有明显的杂蛋白峰,在酶切之后更明显。第二个峰可能就是因为这些杂蛋白引起的。
最后比较好奇,为什么你的单抗经N-糖苷酶切,在去卷积化之后还有这么多峰?
3楼2014-07-08 22:48:15
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的前一个峰拖尾如此严重,第二个峰的质谱图会不会主要是第一个拖尾峰的碎片?
快乐不需要走遍天涯去寻找,只需播一粒种子在脚下。
4楼2014-07-09 08:46:40
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bingling866

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Dionysius at 2014-07-08 22:48:15
首先想问一下你用的什么柱子?
另外你的峰拖尾的很厉害,所以在后一个峰中很可能包含有你的单抗分子。你的第二个峰(酶切前和酶切后)都有明显的杂蛋白峰,在酶切之后更明显。第二个峰可能就是因为这些杂蛋白引起的 ...

用的是安捷伦的一个1000埃的反相柱,这难道是因为我的蛋白不纯?可是分子筛并没有这么多峰啊?还有什么方法能确切的确定一下我的样品纯度?酶切之后的峰基本上和我酶切之前的是对应的,只能说我酶切之前为什么会有那么多峰呢?是因为糖基化不完全,还是别的结构的物质?谢谢!
5楼2014-07-09 13:14:45
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bingling866

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wyy080214 at 2014-07-08 14:08:40
不是很懂,个人感觉,是不是因为中性丢失,可以做做QQQ的中性丢失。另外液相中两个峰可能是异构体。

蛋白制品的异构体?有什么方法来确定一下是不是异构体呢?
6楼2014-07-09 13:16:50
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bingling866

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by kf1009 at 2014-07-09 08:46:40
你的前一个峰拖尾如此严重,第二个峰的质谱图会不会主要是第一个拖尾峰的碎片?

怎么能知道是不是碎片?看二级质谱吗?
7楼2014-07-09 13:18:17
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Dionysius

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by bingling866 at 2014-07-09 13:14:45
用的是安捷伦的一个1000埃的反相柱,这难道是因为我的蛋白不纯?可是分子筛并没有这么多峰啊?还有什么方法能确切的确定一下我的样品纯度?酶切之后的峰基本上和我酶切之前的是对应的,只能说我酶切之前为什么会有 ...

1. 你的峰拖尾太严重了,你可以优化一下液相条件,将两个峰分开,这样更好判断是什么原因造成了两个峰。是蛋白的不同的构象还是其他杂质
2. 单抗分子量的异质性主要是不同的糖基化造成了,而你的样品切掉N-糖修饰之后,分子量的异质性基本没变,真的很奇怪
8楼2014-07-09 23:15:55
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