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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 纳米生物材料 » 氨基化的玻璃与ssDNA作用后，与另一条互补ssDNA作用下不来
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花葬夏祭

新虫 (初入文坛)

[求助] 氨基化的玻璃与ssDNA作用后，与另一条互补ssDNA作用下不来 已有1人参与

本人学化学的，所以对生物的东西不是很了解
实验情况如下：
1.将玻璃氨基化
2.氨基化的玻璃与ssDNA在Tris-Buffer中（20 mM Tris+37.5 mM MgCL2，用HC调节到7.5）于37℃下反应30min，表征证明该ssDNA上去了
3.与另一条互补的ssDNA链作用，希望能够把前一条ssDNA拉下来
第一条cap   ssDNA:    5'-AAT GCT AGC TAA TCA ATC GGG3'
第二条Target ssDNA：5'-CCC GAT TGA TTA GCA AGC ATT-3‘
问题：
第三步，通过互补作用并不能让ssDNA杂交，难道在非均相的DNA杂交对于温度的要求很高吗？（查阅文献知道最适的杂交温度=Tm-15）
求大神指导~~太痛苦了~
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1楼 2014-07-07 16:55:55
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yuntcren

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 花葬夏祭 at 2014-07-17 09:52:20
那这个反应对buffer有什么要求吗，什么na离子，mg离子，EDTA什么的
...

要，就拿PCRbuffer好了
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6楼2014-07-22 12:09:59
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花葬夏祭

新虫 (初入文坛)
没人回到吗~
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2楼2014-07-07 17:56:07
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yuntcren

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2014-07-23 22:04:10
花葬夏祭(likedong1021代发): 金币+5, 感谢回帖交流！ 2014-10-11 18:04:36
两个互补短单链杂交室温就可以，不需要到最适杂交温度。温度越低氢键越稳定，最适杂交温度比半解链温度低些是为了防止互补性不是那么强的非特异杂交。你这个短链室温就可以。
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4楼2014-07-14 16:08:49
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花葬夏祭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuntcren at 2014-07-14 16:08:49
两个互补短单链杂交室温就可以，不需要到最适杂交温度。温度越低氢键越稳定，最适杂交温度比半解链温度低些是为了防止互补性不是那么强的非特异杂交。你这个短链室温就可以。

那这个反应对buffer有什么要求吗，什么na离子，mg离子，EDTA什么的

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5楼2014-07-17 09:52:20
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