24小时热门版块排行榜    

查看: 881  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

花葬夏祭

新虫 (初入文坛)

[求助] 氨基化的玻璃与ssDNA作用后,与另一条互补ssDNA作用下不来 已有1人参与

本人学化学的,所以对生物的东西不是很了解
实验情况如下:
1.将玻璃氨基化
2.氨基化的玻璃与ssDNA在Tris-Buffer中(20 mM Tris+37.5 mM MgCL2,用HC调节到7.5)于37℃下反应30min,表征证明该ssDNA上去了
3.与另一条互补的ssDNA链作用,希望能够把前一条ssDNA拉下来
第一条cap   ssDNA:    5'-AAT GCT AGC TAA TCA ATC GGG3'
第二条Target ssDNA:5'-CCC GAT TGA TTA GCA AGC ATT-3‘
问题:
第三步,通过互补作用并不能让ssDNA杂交,难道在非均相的DNA杂交对于温度的要求很高吗?(查阅文献知道最适的杂交温度=Tm-15)
求大神指导~~太痛苦了~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花葬夏祭

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yuntcren at 2014-07-14 16:08:49
两个互补短单链杂交室温就可以,不需要到最适杂交温度。温度越低氢键越稳定,最适杂交温度比半解链温度低些是为了防止互补性不是那么强的非特异杂交。你这个短链室温就可以。

那这个反应对buffer有什么要求吗,什么na离子,mg离子,EDTA什么的

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-07-17 09:52:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

花葬夏祭

新虫 (初入文坛)

没人回到吗~
2楼2014-07-07 17:56:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuntcren

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2014-07-23 22:04:10
花葬夏祭(likedong1021代发): 金币+5, 感谢回帖交流! 2014-10-11 18:04:36
两个互补短单链杂交室温就可以,不需要到最适杂交温度。温度越低氢键越稳定,最适杂交温度比半解链温度低些是为了防止互补性不是那么强的非特异杂交。你这个短链室温就可以。
4楼2014-07-14 16:08:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuntcren

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 花葬夏祭 at 2014-07-17 09:52:20
那这个反应对buffer有什么要求吗,什么na离子,mg离子,EDTA什么的
...

要,就拿PCRbuffer好了
6楼2014-07-22 12:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 306求调剂 +6 chuanzhu川烛 2026-03-18 6/300 2026-03-22 19:39 by 公瑾逍遥
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 323求调剂 +5 洼小桶 2026-03-18 5/250 2026-03-22 17:38 by luoyongfeng
[考研] 一志愿东华大学化学070300,求调剂 +6 2117205181 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:59 by allen-yin
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +5 生物工程调剂 2026-03-17 9/450 2026-03-21 23:32 by zhujy1982
[考研] 333求调剂 +5 87639 2026-03-21 7/350 2026-03-21 19:31 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +5 纸鱼ly 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:11 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕,总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:16 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生(接收计算机专业调剂) +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考研] 一志愿中国海洋大学,生物学,301分,求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
信息提示
请填处理意见