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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 目的片段回收后浓度较低，如何浓缩？
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张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 目的片段回收后浓度较低，如何浓缩？ 已有6人参与

我回收了我的目的片段，条带很暗且稍偏高，浓度有些低，连接表达载体一直连接不上，希望可以把我的目的片段浓缩一下。不知道该如何浓缩，希望知道的大侠们指点一下 谢谢
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1楼 2014-07-07 16:14:58
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茂林修竹7

金虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-21 11:02:24
引用回帖:
25楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-21 09:08:46
阳性对照就是我最开始pcr时使用的标准菌株模板。因为我要先连接t-载体后测序，测序后会有少许碱基突变，然后用突变的这个序列作为我的目的片段连接表达载体。
第一次扩增的是我的目的片段，不然测序就不会正确呀。...

嗯，这就是 常规的载体构建方法嘛。但是你的问题我还是不明白，越来越来越不明白了。
根据载体构建的常规步骤，1）PCR扩增目的基因，你原始的问题就是这步的扩增目的基因的时候条带不亮，我建议用回收片段再重新扩增。但是你有标准菌株的模板，而且你阳性对照也是很亮的，所以就不明白你的问题了。2）回收片段连接T-vector→测序→酶切→回收目的条带，如果你的问题是这步的回收条带不亮，那我当初的建议就是不可行的。这样的话，那是你酶切的质粒浓度不够，所以建议你重新提取这个中间载体的质粒，提高下浓度，你可以直接放在37℃的烘箱，开盖烘过夜，会蒸发一些水分，质粒的浓度就会提高些，你用这个酶切，回收，在连接你的表达载体。
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将欲取之必先与之
27楼2014-07-21 10:01:36
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
张冰宝(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-07 20:38:27
简单点的就是用胶回收盒子里面的柱子重新富集一遍

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
2楼2014-07-07 16:19:56
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-07-22 20:43:59
我们实验室有专门抽真空的仪器呢

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
3楼2014-07-07 23:12:13
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_深海渔_

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-07-07 16:19:56
简单点的就是用胶回收盒子里面的柱子重新富集一遍

我最近也遇到这方面问题，您能详细的讲一下吗？把纯化回收的DNA溶液放到柱子里然后重新离心吗？谢谢！

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-07-08 00:00:30
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