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cowox

铜虫 (初入文坛)

[求助] 肉汤培养基培养的链球菌老是计数不好,求高人相助 已有3人参与

我挑取单个链球菌菌落到400ml的培养基中,37度摇菌36小时后,吸取1ml至9ml生理盐水中稀释,直到稀释度为10-8,然后取500ul涂布在血琼脂平板上。

稀释的时候我是先将高浓度的稀释液涡旋半分钟,然后再用枪吸取1ml加入到下一个稀释液中,再涡旋。

(1)取稀释用的菌液时,我只是手动摇匀了十几秒,然后吸取了上层菌液1ml,是不是菌液没摇匀?所以上下层菌液密度不一?

(2)我做了四五回了,只有一回10-8长了三四十个菌落,其他的时候都是不长菌。有时候甚至10-5也不长菌。为什么会这样?

(3)4度保存了一两天的菌液是否还适合计数?
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cowox

铜虫 (初入文坛)

另外,而用移液枪稀释的话,会不会有影响?要改用无菌吸管么?
2楼2014-07-06 10:56:55
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发酵生命

金虫 (小有名气)

操作方法也这样,应该没什么问题,会不会是培养基或者培养环境不适合呢
人无远虑,必有近忧
3楼2014-07-06 14:36:57
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cowox

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 发酵生命 at 2014-07-06 14:36:57
操作方法也这样,应该没什么问题,会不会是培养基或者培养环境不适合呢

我就用的液体肉汤培养基37度培养36小时,可以看到液体变浑浊,虽然不是很浑。涂完平板之后也是37度培养12-24小时
4楼2014-07-06 15:47:08
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cowox

铜虫 (初入文坛)

cowox: 回帖置顶 2014-07-06 15:52:59
用玻璃试管稀释和用塑料离心管稀释有区别么?
5楼2014-07-06 15:48:38
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发酵生命

金虫 (小有名气)

★ ★
cowox(dllchina代发): 金币+2, 鼓励热心应助 2014-07-07 00:02:28
引用回帖:
4楼: Originally posted by cowox at 2014-07-06 15:47:08
我就用的液体肉汤培养基37度培养36小时,可以看到液体变浑浊,虽然不是很浑。涂完平板之后也是37度培养12-24小时...

划线试过吗
人无远虑,必有近忧
6楼2014-07-06 16:27:02
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cowox

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 发酵生命 at 2014-07-06 16:27:02
划线试过吗...

没有,我预计先试一下各个稀释倍数的情况
7楼2014-07-06 18:25:58
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cowox: 金币+5, ★★★很有帮助, 确实有可能是没混匀,不过涡旋了半分钟应该也不成问题吧? 2014-07-07 09:52:24
最好第一步稀释用带玻璃珠的,在摇床上打碎,你有有可能是混合不均匀,
8楼2014-07-07 08:09:37
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
cowox: 金币+3, ★★★很有帮助, 都是同一批做的。而且到10-4就没了 2014-07-07 09:53:24
平板是同一批倒的?如果是同一批的平板,那就是混合的问题了,
9楼2014-07-07 08:10:20
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blckly

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cowox: 金币+8, ★★★很有帮助, 多谢帮助 2014-07-13 10:46:48
手动摇匀了十几秒的菌液是很难均匀的,实验要求梯度稀释时在手中敲打80次或者漩涡混合器震荡20秒;
第二个问题就是菌液不均匀;
4度保存了一两天的菌液不适合计数,一般菌液在4度也只能保存4小时相对稳定。
10楼2014-07-07 15:22:05
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