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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 肉汤培养基培养的链球菌老是计数不好，求高人相助
汕头大学海洋科学接受调剂
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cowox

铜虫 (初入文坛)

[求助] 肉汤培养基培养的链球菌老是计数不好，求高人相助 已有3人参与

我挑取单个链球菌菌落到400ml的培养基中，37度摇菌36小时后，吸取1ml至9ml生理盐水中稀释，直到稀释度为10-8，然后取500ul涂布在血琼脂平板上。

稀释的时候我是先将高浓度的稀释液涡旋半分钟，然后再用枪吸取1ml加入到下一个稀释液中，再涡旋。

（1）取稀释用的菌液时，我只是手动摇匀了十几秒，然后吸取了上层菌液1ml，是不是菌液没摇匀？所以上下层菌液密度不一？

（2）我做了四五回了，只有一回10-8长了三四十个菌落，其他的时候都是不长菌。有时候甚至10-5也不长菌。为什么会这样？

（3）4度保存了一两天的菌液是否还适合计数？
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1楼 2014-07-06 10:49:34
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cowox

铜虫 (初入文坛)
另外，而用移液枪稀释的话，会不会有影响？要改用无菌吸管么？
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2楼2014-07-06 10:56:55
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发酵生命

金虫 (小有名气)
操作方法也这样，应该没什么问题，会不会是培养基或者培养环境不适合呢
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人无远虑，必有近忧
3楼2014-07-06 14:36:57
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cowox

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 发酵生命 at 2014-07-06 14:36:57
操作方法也这样，应该没什么问题，会不会是培养基或者培养环境不适合呢

我就用的液体肉汤培养基37度培养36小时，可以看到液体变浑浊，虽然不是很浑。涂完平板之后也是37度培养12-24小时
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4楼2014-07-06 15:47:08
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cowox

铜虫 (初入文坛)
cowox: 回帖置顶 2014-07-06 15:52:59
用玻璃试管稀释和用塑料离心管稀释有区别么？
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5楼2014-07-06 15:48:38
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发酵生命

金虫 (小有名气)
★ ★
cowox(dllchina代发): 金币+2, 鼓励热心应助 2014-07-07 00:02:28
引用回帖:
4楼: Originally posted by cowox at 2014-07-06 15:47:08
我就用的液体肉汤培养基37度培养36小时，可以看到液体变浑浊，虽然不是很浑。涂完平板之后也是37度培养12-24小时...

划线试过吗
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人无远虑，必有近忧
6楼2014-07-06 16:27:02
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cowox

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 发酵生命 at 2014-07-06 16:27:02
划线试过吗...

没有，我预计先试一下各个稀释倍数的情况
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7楼2014-07-06 18:25:58
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cowox: 金币+5, ★★★很有帮助, 确实有可能是没混匀，不过涡旋了半分钟应该也不成问题吧？ 2014-07-07 09:52:24
最好第一步稀释用带玻璃珠的，在摇床上打碎，你有有可能是混合不均匀，
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8楼2014-07-07 08:09:37
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
cowox: 金币+3, ★★★很有帮助, 都是同一批做的。而且到10-4就没了 2014-07-07 09:53:24
平板是同一批倒的？如果是同一批的平板，那就是混合的问题了，
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9楼2014-07-07 08:10:20
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blckly

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cowox: 金币+8, ★★★很有帮助, 多谢帮助 2014-07-13 10:46:48
手动摇匀了十几秒的菌液是很难均匀的，实验要求梯度稀释时在手中敲打80次或者漩涡混合器震荡20秒；
第二个问题就是菌液不均匀；
4度保存了一两天的菌液不适合计数，一般菌液在4度也只能保存4小时相对稳定。
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10楼2014-07-07 15:22:05
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