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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做QPCR实验时没有CT值（信号）出现，有哪些可能的原因？
汕头大学海洋科学接受调剂
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蛋蛋的哥

新虫 (初入文坛)

[求助] 做QPCR实验时没有CT值（信号）出现，有哪些可能的原因？

这是从Trans 实验室常见问题和解答中找到的，总觉得还有其他的什么原因？
引用回帖:
可能原因： （1）反应循环数不够
对策：35个循环以上，可根据实验情况增加循环（如至45cycles），但高于45个循环会增加过多的背景信号。
（2）测荧光信号的步骤有误
对策：一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
（3）引物或探针降解
对策：可通过PAGE电泳检测其完整性。
（4）引物或探针的设计 如探针高于引物的温度不够，造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。
对策：重新设计引物或探针
（5）模板量不足
对策：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
（6）模板降解
对策：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

没多少金币  就拿5个意思一下   希望能再帮想想好还有哪些可能的原因会造成这种现象。
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1楼 2014-07-04 14:05:16
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毛花许地黄

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 蛋蛋的哥 at 2014-07-08 16:27:43
探针法的    非常感谢你   通过Transgen的微客服咨询了他们的技术，已经得到解决了...

你的问题如何解决的啊？我是相同体系温度跑了普通PCR有条带，定量后没有检测到荧光信号，但反应完的体系跑胶也是有单一亮条带的
赞一下 回复此楼
12楼2017-12-10 12:33:38
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查看全部 12 个回答

pzx1004
★
蛋蛋的哥(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-07-04 14:06:43
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-04 22:32:20
做的是染料法的还是探针法的QPCR？可以将QPCR的产物跑个琼脂糖凝胶电泳看看有没有目的条带，染料法的如果有目的条带的话，肯定是Mix的问题，如果探针法的话可能是因为探针没有与模板结合。
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蛋蛋的哥
rainwater
8楼2014-07-04 16:35:12
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lrfmog

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
程序有误，没有设定"READ"
赞一下 回复此楼
9楼2014-07-04 21:52:05
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