应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 在做环介导等温扩增lamp，有些想法和问题想和大家交流请教一下，请前辈们多多指教~
101/1返回列表
查看: 3786  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

暴力曹

银虫 (初入文坛)

[求助] 在做环介导等温扩增lamp，有些想法和问题想和大家交流请教一下，请前辈们多多指教~

这段时间在做这方面的实验，有些问题有些不明白，请各位多指教~
问题一，引物是直接在线网页版设计的，开始用PCR仪做的温度梯度，在61~65这个范围扩增效果都很好，反应1h；前期在干浴锅上65反应1h就能明显看到沉淀，电泳条带也不错，但后来这段时间要么经常扩不出来，或者是需要延长扩增时间才可以，体系条件是完全一样的，而且从61到65都试过，有点疑惑。这种情况是什么原因，酶是新的，内引物也是隔一段时间就更新，会不会是因为外引物时间长了造成的？
问题二，关于反应结果的判定，用SYBR Green I做染色剂，在反应结束后加入观察荧光，这个做的还比较顺利，就是想可不可以在实验一开始就加入染料，然后直接反应结束观察荧光情况就好，这样可以避免污染，不知道可不可行，改天做个实验看看；
问题三，关于钙黄绿素做染色剂，和氯化锰都是直接从生工拿的国产的，便宜得很，但效果还可以，问题其实和一有点相同，就是现在反应时间要90min才能明显反应产生荧光，会不会是这两个试剂对酶活有影响，造成反应减慢？这里面还有个小教训分享一下，一般DNA是用水溶的，当时为了更长时间保存，用TE溶解的，结果反应体系每次在加入模板后就立马有荧光了，很囧，折腾了好久才想到原因。。。
问题四，在nature的文章里看到体系又加甜菜碱和tween20，我现在的体系都没加这两种，其作用大么？
问题五，环引物是不是会提高扩增速度，具体该怎么设计？
有点多，诸位大神多指教~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
无心亦心 自在观真
1楼 2014-07-01 15:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

暴力曹

银虫 (初入文坛)
好的，谢谢~
回复此楼
无心亦心 自在观真
2楼2014-07-04 12:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hooyawang

铜虫 (小有名气)
同学你好，我也在做关于LAMP方面的实验，我想问一下您的钙黄绿素和甜菜碱从哪个公司买的，可以把链接发给我吗？
赞一下(1人) 回复此楼
LAMP
3楼2014-08-21 16:32:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郑传益

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hooyawang at 2014-08-21 16:32:48
同学你好，我也在做关于LAMP方面的实验，我想问一下您的钙黄绿素和甜菜碱从哪个公司买的，可以把链接发给我吗？

同求，1410928287
回复此楼
满足等于堕落
4楼2015-04-25 02:26:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玲玲在人间

铁虫 (小有名气)
加好所有的体系后，吧显色剂点在PCR管盖上，反应后李欣或者甩几下就行的，我的实验是过一段时间（1各月左右）就出现假阳性，怀疑是不是外引物太长造成的，另外，我的4条引物是混合在一起保存的，这样引物之间会不会自连或者造成引物的不稳定，液相得到相关抓也人员的解答，谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2015-05-09 14:07:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

施施施施施

新虫 (初入文坛)
请问楼主用钙黄绿素做出结果了么？我最近也在做这一方面，可是一直没结果。楼主做出来的话，能把体系分享下么？谢谢
赞一下 回复此楼
6楼2016-03-25 17:13:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzc次

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 施施施施施 at 2016-03-25 17:13:30
请问楼主用钙黄绿素做出结果了么？我最近也在做这一方面，可是一直没结果。楼主做出来的话，能把体系分享下么？谢谢

你好，请问你用钙黄绿素做的结果怎么样？我最近也准备用这个做。请教一下
赞一下 回复此楼
7楼2017-02-16 17:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LAMP007

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 暴力曹 at 2014-07-01 15:49:44
这段时间在做这方面的实验，有些问题有些不明白，请各位多指教~
问题一，引物是直接在线网页版设计的，开始用PCR仪做的温度梯度，在61~65这个范围扩增效果都很好，反应1h；前期在干浴锅上65反应1h就能明显看到沉淀 ...

想请教一下为什么我加入了SYBR green I稀释到100×的加入后，在紫外灯下有引物都会显色，你是怎么加入，阴性没有颜色的。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-09-10 23:16:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15112009180

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by LAMP007 at 2017-09-10 23:16:01
想请教一下为什么我加入了SYBR green I稀释到100×的加入后，在紫外灯下有引物都会显色，你是怎么加入，阴性没有颜色的。
...

你的SYBRgreen浓度太低了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-10-14 15:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15112009180

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 15112009180 at 2017-10-14 15:16:11
你的SYBRgreen浓度太低了
...

SYBRGREENl可能被污染了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2017-10-14 15:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员m7ZXyB 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +7 Liwangman 2026-03-15 7/350 2026-03-18 20:08 by walc
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-18 19:54 by 无际的草原
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 0703化学求调剂 总分331 +3 ZY-05 2026-03-13 3/150 2026-03-18 10:58 by macy2011
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 268求调剂 +7 好运连绵不绝 2026-03-12 8/400 2026-03-17 20:28 by xilongliang
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 8/400 2026-03-17 16:57 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 285化工学硕求调剂（081700） +9 柴郡猫_ 2026-03-12 9/450 2026-03-17 10:18 by Sammy2
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭