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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建中质粒酶切问题
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

[求助] 载体构建中质粒酶切问题 已有3人参与

构建的pET28a载体，跑胶检测发现酶切后比空载跑的快正常吗？另外切胶后回收用nanodrop检测发现切后的质粒峰不对，260没有最高峰是什么原因造成的，如何解决？

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天道酬勤
1楼 2014-06-29 01:06:31
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awsqwasq

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看你在质粒上选的两个酶切位点之间有多少bp，一般来说，两个酶切位点之间的bp小于500的话，酶切后的是要比酶切前的空载要慢一点的，如果之间大于500，则可能会出现你说的情况
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13楼2015-09-17 10:09:54
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
帮顶~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
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自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
4楼2014-06-29 06:24:11
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三吉草

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
随风飘摇11: 金币+2, 嗯哼~好的，我试一试 2014-06-29 08:03:13
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-29 15:12:26
gyesang: 回帖置顶 2014-07-15 21:59:54
等你把胶回收完了再取微量样品跑个胶看看，酶切前后有差异就先做试试吧！另外，你的260峰值不好，可能是由于一些酚或醇没除去！比如你的胶回收加水洗脱前酒精没有挥发干净！个人建议你在柱子空转后开盖凉的时间长一点，20-30分钟我都凉过，看你实验安排吧，急着连接就少凉会，祝好运哈！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2014-06-29 07:19:44
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fantasy92

木虫 (小有名气)
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-07-03 12:21:29
是不是因为眼泪掉进去了？
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6楼2014-07-02 16:05:29
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