24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 700  |  回复: 9
当前主题已经存档。

caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 我的重组蛋白用什么条件才可能可溶表达?

我一个蛋白,40K多点,克隆在PET29a中,BL21表达。我摸过很多条件,包括低温,20,25,30,37度,用过不同的IPTG浓度,0.05mM-1.2mM诱导,时间从诱导4h-12h,均不能出现可溶蛋白,只在包涵体中出现,这样不能侧活性,复性的话太麻烦,还不一定成。
我用什么条件才可能使蛋白在上清中出现呢,哪怕只有少量的?当然最好不要换载体等,那样太麻烦,不是很值得。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

木虫 (著名写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
换成这个基因自己的启动子试试
闹太套
2楼2008-03-28 11:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caiqingchong

木虫 (著名写手)

令:pet系列质粒能否在jm109中表达少量蛋白?
3楼2008-03-28 12:35:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ypan

木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx,
回答3楼的问题!
不可以!JM109是克隆菌,和pET系列质粒配套的表达菌大多为BL21(DE3)
4楼2008-03-28 12:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

轻5飞扬

金虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx,
呵呵,想要上清蛋白,只能多试载体,一般来讲换条件也是碰运气,可以试试pet32(好像有个S标签,利于溶)或者加其它的标签,pMAL 或pGEX
5楼2008-03-28 18:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sofu

金虫 (正式写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
我听说加iptg时,较低的菌浓度可以促进可溶性表达
"An expert is a man who has made all the mistakes which can be made, in a very narrow field." -- Niels Henrik David Bohr
6楼2008-03-28 20:38:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mark32280667806


reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
我看到过一篇文献,培养方法很特别,可以提高蛋白的可溶性
7楼2008-03-29 23:35:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evarain

金虫 (小有名气)

曾经看到有文献提到过,换成BL21(DE3)plys (表达毒性蛋白的菌株),也许能得到可溶性表达。你可以试一试。
8楼2008-03-30 09:44:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):welcome
表达的量太高 蛋白不能正确地折叠可能是造成包含体产生的原因 可以诱导的时间短一点 比如1个小时 但是问题是到底能表达多少 需要楼主摸索
还有国内外确实有人在培养基里加了甜菜碱之类的物质 这样来提高可溶蛋白
但是是不是适合楼主做值得商榷 主要的一点是楼主要做后续的活性测定 前面的表达纯化的操作以及试剂的选用都要谨慎。
活着就要让人感受到你的存在。
9楼2008-03-30 12:16:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):welcome
用JM109(DE3)也是可以表达含有T7启动子的PET之类重组质粒。

关于增加可溶表达,我曾在本论坛作了详细的介绍,你搜一下吧。。。
10楼2008-03-30 19:00:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员962cQt 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 南京大学化学调剂 +5 景随风 2026-03-29 8/400 2026-03-29 13:00 by 无际的草原
[考研] 318一志愿吉林大学生物与医药 求调剂 +4 笃行致远. 2026-03-28 4/200 2026-03-29 11:55 by longlotian
[考研] 330分求调剂 +5 qzenlc 2026-03-29 5/250 2026-03-29 07:37 by 无际的草原
[考研] 生物学学硕,一志愿湖南大学,初试成绩338 +6 YYYYYNNNNN 2026-03-26 7/350 2026-03-28 20:52 by 唐沐儿
[考研] 299求调剂 +7 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 7/350 2026-03-28 13:09 by 唐沐儿
[考研] 材料277求调剂 +7 min3 2026-03-24 7/350 2026-03-28 11:39 by xuxiang
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 085701环境工程求调剂 +9 多久上课 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:58 by fmesaito
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕,求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 一志愿上海理工能源动力(085800)310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 283求调剂(080500) +4 A child 2026-03-27 4/200 2026-03-27 15:34 by XPU李庆
[考研] 复试调剂,一志愿南农083200食品科学与工程 +5 XQTJZ 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:49 by 狂炫麦当当
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 打过很多竞赛,085406控制工程300分,求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 296求调剂 +4 汪!?! 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪!?!
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
信息提示
请填处理意见