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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 我的重组蛋白用什么条件才可能可溶表达?

我一个蛋白,40K多点,克隆在PET29a中,BL21表达。我摸过很多条件,包括低温,20,25,30,37度,用过不同的IPTG浓度,0.05mM-1.2mM诱导,时间从诱导4h-12h,均不能出现可溶蛋白,只在包涵体中出现,这样不能侧活性,复性的话太麻烦,还不一定成。
我用什么条件才可能使蛋白在上清中出现呢,哪怕只有少量的?当然最好不要换载体等,那样太麻烦,不是很值得。
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):welcome
用JM109(DE3)也是可以表达含有T7启动子的PET之类重组质粒。

关于增加可溶表达,我曾在本论坛作了详细的介绍,你搜一下吧。。。
10楼2008-03-30 19:00:54
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biogefart

木虫 (著名写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
换成这个基因自己的启动子试试
闹太套
2楼2008-03-28 11:54:44
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caiqingchong

木虫 (著名写手)

令:pet系列质粒能否在jm109中表达少量蛋白?
3楼2008-03-28 12:35:58
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ypan

木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx,
回答3楼的问题!
不可以!JM109是克隆菌,和pET系列质粒配套的表达菌大多为BL21(DE3)
4楼2008-03-28 12:39:50
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