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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我的重组蛋白用什么条件才可能可溶表达？
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caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 我的重组蛋白用什么条件才可能可溶表达？

我一个蛋白，40K多点，克隆在PET29a中，BL21表达。我摸过很多条件，包括低温，20，25，30，37度，用过不同的IPTG浓度，0.05mM-1.2mM诱导，时间从诱导4h-12h，均不能出现可溶蛋白，只在包涵体中出现，这样不能侧活性，复性的话太麻烦，还不一定成。
我用什么条件才可能使蛋白在上清中出现呢，哪怕只有少量的？当然最好不要换载体等，那样太麻烦，不是很值得。
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1楼 2008-03-28 07:57:56
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biogefart

木虫 (著名写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
换成这个基因自己的启动子试试
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闹太套
2楼2008-03-28 11:54:44
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caiqingchong

木虫 (著名写手)
令：pet系列质粒能否在jm109中表达少量蛋白？
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3楼2008-03-28 12:35:58
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ypan

木虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx,
回答3楼的问题！
不可以！JM109是克隆菌，和pET系列质粒配套的表达菌大多为BL21(DE3)
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4楼2008-03-28 12:39:50
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx,
呵呵,想要上清蛋白,只能多试载体,一般来讲换条件也是碰运气,可以试试pet32(好像有个S标签,利于溶)或者加其它的标签,pMAL 或pGEX
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5楼2008-03-28 18:48:54
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sofu

金虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
我听说加iptg时，较低的菌浓度可以促进可溶性表达
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"An expert is a man who has made all the mistakes which can be made, in a very narrow field." -- Niels Henrik David Bohr
6楼2008-03-28 20:38:34
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mark32280667806

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
我看到过一篇文献，培养方法很特别，可以提高蛋白的可溶性
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7楼2008-03-29 23:35:47
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evarain

金虫 (小有名气)
曾经看到有文献提到过，换成BL21(DE3)plys （表达毒性蛋白的菌株），也许能得到可溶性表达。你可以试一试。
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8楼2008-03-30 09:44:35
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):welcome
表达的量太高 蛋白不能正确地折叠可能是造成包含体产生的原因 可以诱导的时间短一点 比如1个小时 但是问题是到底能表达多少 需要楼主摸索
还有国内外确实有人在培养基里加了甜菜碱之类的物质 这样来提高可溶蛋白
但是是不是适合楼主做值得商榷 主要的一点是楼主要做后续的活性测定 前面的表达纯化的操作以及试剂的选用都要谨慎。
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活着就要让人感受到你的存在。
9楼2008-03-30 12:16:29
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):welcome
用JM109（DE3）也是可以表达含有T7启动子的PET之类重组质粒。

关于增加可溶表达，我曾在本论坛作了详细的介绍，你搜一下吧。。。
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10楼2008-03-30 19:00:54
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