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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我的重组蛋白用什么条件才可能可溶表达？
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caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 我的重组蛋白用什么条件才可能可溶表达？

我一个蛋白，40K多点，克隆在PET29a中，BL21表达。我摸过很多条件，包括低温，20，25，30，37度，用过不同的IPTG浓度，0.05mM-1.2mM诱导，时间从诱导4h-12h，均不能出现可溶蛋白，只在包涵体中出现，这样不能侧活性，复性的话太麻烦，还不一定成。
我用什么条件才可能使蛋白在上清中出现呢，哪怕只有少量的？当然最好不要换载体等，那样太麻烦，不是很值得。
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1楼 2008-03-28 07:57:56
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):welcome
表达的量太高 蛋白不能正确地折叠可能是造成包含体产生的原因 可以诱导的时间短一点 比如1个小时 但是问题是到底能表达多少 需要楼主摸索
还有国内外确实有人在培养基里加了甜菜碱之类的物质 这样来提高可溶蛋白
但是是不是适合楼主做值得商榷 主要的一点是楼主要做后续的活性测定 前面的表达纯化的操作以及试剂的选用都要谨慎。
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活着就要让人感受到你的存在。
9楼2008-03-30 12:16:29
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biogefart

木虫 (著名写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
换成这个基因自己的启动子试试
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闹太套
2楼2008-03-28 11:54:44
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caiqingchong

木虫 (著名写手)
令：pet系列质粒能否在jm109中表达少量蛋白？
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3楼2008-03-28 12:35:58
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ypan

木虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx,
回答3楼的问题！
不可以！JM109是克隆菌，和pET系列质粒配套的表达菌大多为BL21(DE3)
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-03-28 12:39:50
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