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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

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专业: 环境微生物学

[求助] 荧光定量PCR 扩增曲线求助已有6人参与

诸位大侠我的试剂是使用SYBR.TAKARA的，机子是AB7300，但是做出来的扩增曲线不稳定啊。做的时候很多有时候做的还行，但是在有的时候扩增曲线出现在基线上面，有时候就是没有平台期，扩增曲线乱七八糟的。想问问这是什么原因呢？我从以下3方面入手解决。1.试剂（开启后4°避光保存） 2。加样误差（已经很小心了） 3.仪器的稳定性（换了扩增的孔道）。事实上到现在都没查出来是什么原因。求教诸位大侠这究竟是怎么回事，问了其他实验室的师兄他们也不是很清楚。下面是我的图片。

IEF扩增曲线（58.5）.jpg

IEF标准曲线.jpg

平行1溶解曲线.jpg

扩增曲线3号平行.jpg

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生命不息奋斗不止

1楼 2014-06-22 14:17:54

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

vege的桌子

铜虫 (小有名气)

应助: 22 (小学生)
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虫号: 1352276
注册: 2011-07-21
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★
冷雁孤旅(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-24 14:19:53
冷雁孤旅: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-24 15:23:11

引用回帖:

11楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2014-06-24 10:30:51
引物跑了胶溶解曲线是单峰就是扩增曲线有时候可以有时候很差不明白原因请问你们在加入SYBR I的时候是在避光操作么还是在超净台上打开灯操作呢？我的SYBR I在光照下曝光时间有一个小时吧。（因为每次加样都得 ...

尽量在光线比较暗的环境下加吧，曝光时间有一个小时可能是有点久了，换一支新的吧，我以前用Takara的也没有出现这种情况