24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3011  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhaoxinrui0511

金虫 (小有名气)

[求助] 如何获得含有内含子基因的完整cDNA序列? 已有4人参与

我要扩增的是一个黑曲霉基因(含有两段内含子)的cDNA序列,基因结构是这样的:
1-186是外显子(186 bp)
187-232是内含子
233-313是外显子(81 bp)
314-362是内含子
363-1583是外显子(1221 bp)
之前尝试了分别用PCR扩增三段外显子,再用融合PCR的方法连接,但由于前两个外显子片段太短而失败了,
请问有其他什么好办法吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoxinrui0511

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by cm8002 at 2014-06-23 00:30:39
就按照你之前融合PCR的作法 第一段可以用引物扩出来 第二段合成两条长引物相互退火延伸就行 再将前两段先融合 最后剩下的就好办了吧 但是这样步骤比较多 费事 要是有钱干脆买个反转录试剂盒
...

非常感谢
15楼2014-06-24 17:06:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

lone007

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-06-22 11:32:34
zhaoxinrui0511: 金币+2, ★★★很有帮助, 不好意思,可能是我没表述清楚,我需要的是没有内含子的基因序列,除了RT之外,还有其他的方法吗 2014-06-22 16:08:03
cDNA的定义是:以成熟mRNA为模板在逆转录酶的作用下合成DNA单链,之后在DNA聚合酶的作用下合成的双链DNA。成熟的mRNA是不含有内含子的,因此,cDNA可以视为是基因组全部外显子的集合,无论你怎么扩都不会包含内含子。
做一个合格的普通人
2楼2014-06-22 08:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaoxinrui0511(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-22 12:30:23
zhaoxinrui0511: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-22 16:03:48
扩增cDNA要提RNA,逆转录后的产物做模版。要是嫌麻烦,就叫核酸合成公司合成吧,很快的。
3楼2014-06-22 09:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

这是马甲

至尊木虫 (著名写手)

谁的马甲都不是

含内含子的cDNA~~~
这是一只什么都不懂的马甲~~~
4楼2014-06-22 09:56:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 月@163.com 2026-04-07 3/150 2026-04-07 11:19 by aidndnjck
[考研] 280求调剂 +6 李rien 2026-04-04 6/300 2026-04-07 08:34 by xihu1109
[考研] 材料334求调剂 +19 Eecho# 2026-04-03 19/950 2026-04-06 08:37 by 小小树2024
[考研] 085602调剂 初试总分335 +9 19123253302 2026-04-05 9/450 2026-04-06 06:14 by houyaoxu
[考研] 22408 总分320,一篇论文二作,两个国三,求调剂 +3 Leomulufu 2026-04-04 5/250 2026-04-05 19:04 by chongya
[考研] 085600调剂 +9 东照照照 2026-04-04 9/450 2026-04-05 13:44 by ujn_zhuj
[考研] 电子信息调剂交叉学科有推荐吗 +6 jhtfeybgj 2026-04-01 9/450 2026-04-05 11:13 by 猪会飞
[考研] 材料调剂 +7 dxy调剂 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:15 by 陌秋26
[考研] 材料工程085601数二英一335求调剂 +6 双马尾痞老板2 2026-03-31 6/300 2026-04-04 22:29 by hemengdong
[考研] 可跨专业调剂 +3 周的得地 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:21 by barlinike
[考研] 调剂 +11 JLLLLLLLLLL 2026-04-03 11/550 2026-04-04 22:21 by hemengdong
[考研] 一志愿重庆大学085404,总分314分,求调剂 +4 zf83hn 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:25 by 啵啵啵0119
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 求调剂 +4 15064154688 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:07 by zrongyan
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考研] 262求调剂 +6 励志一定发文章 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:54 by linyelide
[考研] 286求调剂 +5 Sa67890. 2026-04-01 7/350 2026-04-01 19:50 by 6781022
[考研] 262求调剂 +9 励志一定发文章 2026-03-31 10/500 2026-04-01 12:22 by sunshine0013
[考研] 一志愿北交材料工程总分358 +5 cs0106 2026-04-01 7/350 2026-04-01 11:45 by wangjy2002
[考研] 322求调剂 +8 三水sss 2026-04-01 8/400 2026-04-01 10:19 by 唐沐儿
信息提示
请填处理意见