应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切总是切不开。。。有没有人用过NEB的NotI这个酶？
52/1返回列表
查看: 7326  |  回复: 36
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

seven拂晓

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切总是切不开。。。有没有人用过NEB的NotI这个酶？ 已有10人参与

各位同学
我这两个礼拜一只在用NOtI和sfiI这两个酶双酶切载体，但是一直都切不太出来。为了找出是哪个酶的问题，我是这样做的：
在一号管中加入酶切体系和NOTI酶，37度7个小时，电泳检测，发现酶切后的带和未酶切的带大小相同。说明酶切不成功。
在二号管中加入酶切体系和sfiI酶，50度过夜。电泳检测，酶切后的带比未酶切的带迁移的慢，说明已经成功切开了。

切片段的时候，是在以上同样的条件下（notI酶37度7个小时，再加sfiI酶50度过夜），电泳检测是正确的。
注：这两个酶用的都是NEB的，所用的buffer是一样的，都是一个叫cutsmart的buffer。说明书上写的是notI酶37度酶切15-20分钟，sfiI酶50度酶切15-20分钟。

各位高手知不知道这是怎么回事啊 急求帮助啊 这个NOTI贼贵贼贵的，用不起了！！！！！！！！！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-06-20 15:09:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

554526385

铜虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 15:22:18
引用回帖:
5楼: Originally posted by seven拂晓 at 2014-06-20 16:10:51
不太懂甲基化，刚才百度了下，还是不太明白，请问质粒也会甲基化吗...

为什么不会呢，会受到大肠杆菌甲基化酶的影响。在site-mute
实验中，就会用Dpn1来区别PCR得到的质粒（未甲基化）和提取质粒（甲基化）。
赞一下 回复此楼
我存在
17楼2014-06-21 08:49:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 37 个回答

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
seven拂晓: 金币+5 2014-06-20 16:11:06
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-21 00:55:51
seven拂晓: 金币+5 2014-06-21 23:40:08
NOTI酶按理说挺好切的啊，TAKARA的就很好切。你的1ug质粒加了多少酶？试试多加一点切切看。
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-20 15:30:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seven拂晓

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-20 15:30:51
NOTI酶按理说挺好切的啊，TAKARA的就很好切。你的1ug质粒加了多少酶？试试多加一点切切看。

我没有测质粒浓度，50ul的体系加了1ul的酶，30ul的质粒，质粒是比较多，可是总得有一部分切开的吧。电泳显示就一条单一的带
赞一下 回复此楼
3楼2014-06-20 15:36:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

554526385

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
seven拂晓: 金币+5 2014-06-20 16:10:05
seven拂晓: 金币+10 2014-06-21 23:39:30
NOtI 的酶切效果受CG methylase导致的DNA甲基化的影响，严重影响
赞一下(2人) 回复此楼
我存在
4楼2014-06-20 15:50:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 37 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +3 SYA！ 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 291求调剂 +5 hhhhxn.. 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:54 by ms629
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +3 我爱学电池 2026-03-23 3/150 2026-03-23 17:16 by AZMK
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +5 vv迷 2026-03-22 5/250 2026-03-23 07:36 by Iveryant
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭