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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 蛋白不挂柱 已有6人参与

好不容易表达出来了,测序没问题,可溶性表达不挂Ni柱,包涵体用8M尿素变性过柱子也不挂,目的蛋白直接流出来了,到底是为什么呢?载体是pET22b
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善由心生
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duanjifu520

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
wqertyre: 金币+4 2014-06-21 15:28:04
建议楼主查阅文献 对比蛋白纯化的物理条件,如ph 等等,柱子条件等等。如果这些都没问题,最后有可能是构建出了问题,例如你的标签被蛋白折叠过程中包裹到内部了,标签不在表面!慢慢排除原因吧

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2014-06-21 13:59:56
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-06-16 12:40:44
wqertyre: 金币+2 2014-06-18 15:48:47
上样平衡溶液中不能有咪唑,PH最好在7.5左右,样品也是一样的条件。
2楼2014-06-16 12:27:05
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-16 12:27:05
上样平衡溶液中不能有咪唑,PH最好在7.5左右,样品也是一样的条件。

10mM的咪唑应该没有影响吧
善由心生
3楼2014-06-16 12:54:07
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古月木木

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wqertyre: 金币+2 2014-06-18 15:48:39
平衡和加入目的蛋白后,放入4℃一定的时间,促进其特异性结合,
4楼2014-06-16 15:00:04
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