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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白不挂柱
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 蛋白不挂柱 已有6人参与

好不容易表达出来了，测序没问题，可溶性表达不挂Ni柱，包涵体用8M尿素变性过柱子也不挂，目的蛋白直接流出来了，到底是为什么呢？载体是pET22b
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善由心生
1楼 2014-06-16 12:00:27
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-16 12:40:44
wqertyre: 金币+2 2014-06-18 15:48:47
上样平衡溶液中不能有咪唑，PH最好在7.5左右，样品也是一样的条件。
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2楼2014-06-16 12:27:05
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-16 12:27:05
上样平衡溶液中不能有咪唑，PH最好在7.5左右，样品也是一样的条件。

10mM的咪唑应该没有影响吧
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善由心生
3楼2014-06-16 12:54:07
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古月木木

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wqertyre: 金币+2 2014-06-18 15:48:39
平衡和加入目的蛋白后，放入4℃一定的时间，促进其特异性结合，
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4楼2014-06-16 15:00:04
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wqertyre at 2014-06-16 12:54:07
10mM的咪唑应该没有影响吧...

去掉试一试，一班不加咪唑。
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5楼2014-06-16 20:05:17
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sqd767019087

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用his抗体试试 看看有没有表达his
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6楼2014-06-16 21:06:53
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liu208xj

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wqertyre: 金币+2 2014-06-18 15:47:46
原因有以下几个点：1）树脂Ni流失；2）去掉10mM咪唑；3）调整pH在8.0以上；
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7楼2014-06-17 15:40:47
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liu208xj at 2014-06-17 15:40:47
原因有以下几个点：1）树脂Ni流失；2）去掉10mM咪唑；3）调整pH在8.0以上；

为什么要PH8.0以上，有什么道理吗？
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善由心生
8楼2014-06-18 15:47:35
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 古月木木 at 2014-06-16 15:00:04
平衡和加入目的蛋白后，放入4℃一定的时间，促进其特异性结合，

怎么又碰到你了
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善由心生
9楼2014-06-18 15:48:33
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古月木木

新虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wqertyre at 2014-06-18 15:48:33
怎么又碰到你了...

啊，是吗？好吧，你好
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10楼2014-06-18 16:08:31
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