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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 蛋白不挂柱 已有6人参与

好不容易表达出来了,测序没问题,可溶性表达不挂Ni柱,包涵体用8M尿素变性过柱子也不挂,目的蛋白直接流出来了,到底是为什么呢?载体是pET22b
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善由心生
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-06-16 12:40:44
wqertyre: 金币+2 2014-06-18 15:48:47
上样平衡溶液中不能有咪唑,PH最好在7.5左右,样品也是一样的条件。
2楼2014-06-16 12:27:05
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-16 12:27:05
上样平衡溶液中不能有咪唑,PH最好在7.5左右,样品也是一样的条件。

10mM的咪唑应该没有影响吧
善由心生
3楼2014-06-16 12:54:07
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古月木木

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wqertyre: 金币+2 2014-06-18 15:48:39
平衡和加入目的蛋白后,放入4℃一定的时间,促进其特异性结合,
4楼2014-06-16 15:00:04
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wqertyre at 2014-06-16 12:54:07
10mM的咪唑应该没有影响吧...

去掉试一试,一班不加咪唑。
5楼2014-06-16 20:05:17
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sqd767019087

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用his抗体试试 看看有没有表达his
6楼2014-06-16 21:06:53
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liu208xj

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wqertyre: 金币+2 2014-06-18 15:47:46
原因有以下几个点:1)树脂Ni流失;2)去掉10mM咪唑;3)调整pH在8.0以上;
7楼2014-06-17 15:40:47
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
7楼: Originally posted by liu208xj at 2014-06-17 15:40:47
原因有以下几个点:1)树脂Ni流失;2)去掉10mM咪唑;3)调整pH在8.0以上;

为什么要PH8.0以上,有什么道理吗?
善由心生
8楼2014-06-18 15:47:35
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 古月木木 at 2014-06-16 15:00:04
平衡和加入目的蛋白后,放入4℃一定的时间,促进其特异性结合,

怎么又碰到你了
善由心生
9楼2014-06-18 15:48:33
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古月木木

新虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by wqertyre at 2014-06-18 15:48:33
怎么又碰到你了...

啊,是吗?好吧,你好
10楼2014-06-18 16:08:31
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