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王志艳5新虫 (初入文坛)
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病毒的分离纯化 已有4人参与
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| 病毒的分离纯化都有什么方法 具体步骤 |
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噬斑纯化 1.将收取的病毒于－80 ℃和37 ℃ 之间反复冻融3次，3000 r/min离心15 min，0.45μm滤器过滤。 2.吸取200 μL病毒上清液以DMEM依次稀释成104-108倍 5个浓度梯度，将这5个浓度的病毒上清稀释液各200 μL 分别接种于3-5×105/孔vero细胞中（提前一天接种，保证第二天到80-90%融合）（六孔板） 3.37 ℃ 孵育1.0-2.0 h，吸出病毒上清液，每孔加入1 mL覆盖液（2×DMEM与1.0%的低熔点琼脂糖等量混合，三蒸水溶解），继续培养直至噬斑形成。 注意：配制好的琼脂糖液在120度，20分钟高压灭菌，并立即放到45度－47度的水浴中，隔几分钟晃动一次以确保均匀熔化。 4.荧光显微镜观察GFP表达情况。 5.挑取GFP表达阳性的噬斑，反复冻融，离心后再次感染vero 细胞，待细胞出现明显病变效应时回收细胞。（此步骤重复做至少3-5次） |
10楼2015-09-06 16:56:30
Davie_Meagen
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2楼2014-06-16 12:20:20
王志艳5
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3楼2014-06-17 16:02:29
lihuan0525
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4楼2014-06-17 21:10:56