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碧荷叶

铜虫 (初入文坛)

[交流] PCR产物可以直接用来做酶切吗？

最近作PCR产物双酶切，回收后酶切1.5h，3.5h和过夜，最后电泳图没什么区别，怀疑酶切开。有人说用PCR产物直接做双酶切比回收后再切更容易。请教PCR产物可以直接用来做双酶切吗？
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1楼 2008-03-24 15:51:08
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
我一般都是回收后再双酶切的，一般引物设计的时候多设计几个保护碱基就很好切，你要是实在切不开就连了t载体再切吧，不过挺麻烦的，感觉还是实验设计的时候多作些工作后边就省力了
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19楼2008-04-06 14:19:46
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long0553299

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
首先我没有直接切过,所以不做讨论.双酶切时buffer的选择很重要,1,必须考虑两种的共同活性;2,考虑酶的活性是否有效.    仅供参考!
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2楼2008-03-24 16:08:49
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savid888

木虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
还是先做个TA克隆吧，然后再切。PCR反应产物不好切。
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3楼2008-03-24 16:53:37
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realbeyond

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
个人认为
还是不要切的好
很麻烦的
建议换其它方法
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4楼2008-03-24 17:00:52
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