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碧荷叶

铜虫 (初入文坛)

[交流] PCR产物可以直接用来做酶切吗?

最近作PCR产物双酶切,回收后酶切1.5h,3.5h和过夜,最后电泳图没什么区别,怀疑酶切开。有人说用PCR产物直接做双酶切比回收后再切更容易。请教PCR产物可以直接用来做双酶切吗?
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realbeyond

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
个人认为
还是不要切的好
很麻烦的
建议换其它方法
4楼2008-03-24 17:00:52
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long0553299


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
首先我没有直接切过,所以不做讨论.双酶切时buffer的选择很重要,1,必须考虑两种的共同活性;2,考虑酶的活性是否有效.    仅供参考!
2楼2008-03-24 16:08:49
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savid888

木虫 (正式写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
还是先做个TA克隆吧,然后再切。PCR反应产物不好切。
3楼2008-03-24 16:53:37
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花枝俏

铜虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
PCR产物做双酶切有的片段很好切,有的片段很难切,这主要和PCR片段的二级结构有关。如果双酶切很难切,就把整个片段分部分片段扩增后,用单酶切。
轻用其芒,动即有伤,是为凶器;深藏若拙,临机取决,是为利器。
5楼2008-03-24 17:36:44
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