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碧荷叶

铜虫 (初入文坛)

[交流] PCR产物可以直接用来做酶切吗？

最近作PCR产物双酶切，回收后酶切1.5h，3.5h和过夜，最后电泳图没什么区别，怀疑酶切开。有人说用PCR产物直接做双酶切比回收后再切更容易。请教PCR产物可以直接用来做双酶切吗？
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1楼 2008-03-24 15:51:08
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傻子

木虫 (正式写手)
reasonspare(金币+0,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心.而且很有幽默,但是不要让人误会你的意思.
引用回帖:
Originally posted by annwt at 2008-3-24 20:57:
我还看了你的另一个帖子，知道你酶切是连接转化，如果酶切位点在PCR产物的两端，PCR产物酶切后很难判断是否切开，以至影响下一步的连接转化，如果一次成功没的说,如果多次失败,建议先回收加A连T载体转化，再提质粒 ...

同意，有时候无法确定是否切开，这么做比较保险，不差那么一步吧。直接切有时候要看人品滴……^_^
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1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能，国家免检优质产品。
11楼2008-03-25 12:39:06
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long0553299

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
首先我没有直接切过,所以不做讨论.双酶切时buffer的选择很重要,1,必须考虑两种的共同活性;2,考虑酶的活性是否有效.    仅供参考!
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2楼2008-03-24 16:08:49
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savid888

木虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
还是先做个TA克隆吧，然后再切。PCR反应产物不好切。
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3楼2008-03-24 16:53:37
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realbeyond

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
个人认为
还是不要切的好
很麻烦的
建议换其它方法
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4楼2008-03-24 17:00:52
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