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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 高手指教一下怎样使此图片清晰及酶切不完全的问题
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synhily

木虫 (正式写手)

[交流] 高手指教一下怎样使此图片清晰及酶切不完全的问题

请教大家，怎样使得我的电泳图片变清晰。【4】Marker，从上到下的大小为200，500，800，1500，2000，3000，5000，共7条带。【3】我需要的是在309，718和614分别有三条带，309和718的两条可以看见，但是614看不清楚（我认为是614和718离得较近，导致614那条带看不清楚，也许专家认为没有酶切出614来）；另外1332处那条带由于没有完全切开而存在，它的存在也不能算错。【2】564和977处有两条带，是我所希望的；1641处同样有一条没有酶切完全的带。【1】酶切的就是这个大小的DNA片段。


希望高手指教：
1，如何使得我的图片变清晰，您能具体的说下使用的软件及修改的详细过程吗？
2，导致酶切不完全的原因是什么呢？
（100微升的反应体系，60微升TE溶解后，取5微升的DNA样品，酶用量从1增加到2微升，酶切时间从4个小时增加到过夜，pcr后的产物经过了2次纯化，经pcr扩增、割胶回收的产物分别用ddH20和TE缓冲液回收）这些方法我都试过了，可是，酶切还是不完全，高手不吝赐教！
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1楼 2008-03-24 11:44:48
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synhily

木虫 (正式写手)
版主版主，我在论文投稿版里面昨天发过帖子，可能是发的地方不对吧，没有虫虫回复，想在这里再发一次，您不要删掉我的帖子啊。
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2楼2008-03-24 11:47:47
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
量少，你看MARKER多亮。
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细推物理须行乐。
3楼2008-03-24 14:39:02
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synhily

木虫 (正式写手)
不是啊，我1孔里面点样为2微升都可以看清楚，2，3，4空里面的加样量都为5微升，可是看不清楚，而且酶切也不完全，呜呜。
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4楼2008-03-24 15:11:59
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long0553299

量少了,酶切后每个组份的量都在下降,而且核苷酸数也在下降,所以亮度会下降的.酶切不完全,可能是你的酶活性不高了,可以考虑买一支新的,或测序鉴定是不是你的那个酶切位点序列发生了改变.        仅供参考!!!

[ Last edited by long0553299 on 2008-3-24 at 16:01 ]
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5楼2008-03-24 15:58:59
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synhily

木虫 (正式写手)
谢谢4楼的虫虫啊，感谢您的回复。希望大家共同来讨论这个问题呀！
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6楼2008-03-24 16:15:11
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synhily

木虫 (正式写手)
还有哪位虫有了解此现象产生的原因，期待大家的回复啊！
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7楼2008-03-24 18:36:27
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花枝俏

铜虫 (小有名气)
（1）你的酶切片段多大啊？按照你的说法大小应是1641，但是我看你扩增出来的片段（[1]孔里）比1641小；
（2）你的[1]孔里的PCR产物不干净，我发现在3000附近有一条很弱的带，1641的片段可能是3000的那条带切的结果；虽然3000那条带很弱，但是如果被切成同样大小的片段后，酶切片段又会变强；
（3）你的PCR产物可能有非特异扩增，而且你酶切量少了；
（4）跑胶的时候，EB量少加些，背景低反而弱带易显现；胶的浓度稍大些；换用DL2000marker.
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轻用其芒，动即有伤，是为凶器；深藏若拙，临机取决，是为利器。
8楼2008-03-24 20:16:45
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