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synhily

木虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
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专业: 微生物遗传育种学

[交流] 高手指教一下怎样使此图片清晰及酶切不完全的问题

请教大家，怎样使得我的电泳图片变清晰。【4】Marker，从上到下的大小为200，500，800，1500，2000，3000，5000，共7条带。【3】我需要的是在309，718和614分别有三条带，309和718的两条可以看见，但是614看不清楚（我认为是614和718离得较近，导致614那条带看不清楚，也许专家认为没有酶切出614来）；另外1332处那条带由于没有完全切开而存在，它的存在也不能算错。【2】564和977处有两条带，是我所希望的；1641处同样有一条没有酶切完全的带。【1】酶切的就是这个大小的DNA片段。

希望高手指教：
1，如何使得我的图片变清晰，您能具体的说下使用的软件及修改的详细过程吗？
2，导致酶切不完全的原因是什么呢？
（100微升的反应体系，60微升TE溶解后，取5微升的DNA样品，酶用量从1增加到2微升，酶切时间从4个小时增加到过夜，pcr后的产物经过了2次纯化，经pcr扩增、割胶回收的产物分别用ddH20和TE缓冲液回收）这些方法我都试过了，可是，酶切还是不完全，高手不吝赐教！

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1楼 2008-03-24 11:44:48

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long0553299

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虫号: 529171

量少了,酶切后每个组份的量都在下降,而且核苷酸数也在下降,所以亮度会下降的.酶切不完全,可能是你的酶活性不高了,可以考虑买一支新的,或测序鉴定是不是你的那个酶切位点序列发生了改变. 仅供参考!!!

[ Last edited by long0553299 on 2008-3-24 at 16:01 ]