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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问我的菌落PCR测序产物目的片段是什么
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
追邃2015: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-06-14 21:26:57
引用回帖:
18楼: Originally posted by 追邃2015 at 2014-06-13 15:51:50
模版是cDNA，目的片段620bp，这是我菌落PCR的图片，其中左边Marker1000,前6个样品引物为M13，后六个样品引物是M13和我设计的简并引物，再往后2个是我之前传上去的测序结果的菌落pcr(引物M13),一直找不到原因，为什 ...

1.LZ你现在最关键的问题是你的T载体到底连上了多大的序列。你的菌落PCR验证大小是600左右，但是送去测序的结果除去载体前后50bp也有将近1200的大小。到底是测序公司把别人的结果弄成你的了还是你的菌落PCR验证不可靠？你先和测序公司联系下，让他们仔细核对下你的样品编号，自己也可以把这次测序的转化子所含质粒提出来酶切检测大小并以质粒为模板PCR验证或者直接把质粒送测序。经过上面的验证如果连的是600那说明你的菌落PCR可靠，可以继续进行下面的实验。假如验证是1200bp那问题就多了。
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大家相互帮助哈
21楼2014-06-14 14:30:30
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
20楼: Originally posted by 追邃2015 at 2014-06-13 16:15:15
以上的第二个6个样品的引物是M13F-我自己设计的下游引物，另外我刚做了拿我自己的引物做菌落pcr验证，以下是图片：麻烦你帮我看看是我哪部出错了吗？这个测序都快一个月了，太烦人了，刚换了家测序公司，不知道结果 ...

你到现在总共进行了几次测序？是挑不同的转化子测序还是挑同一个反复测序？这几次的测序结果一致还是每次的结果无论序列还是大小都不一样？
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大家相互帮助哈
22楼2014-06-14 14:32:14
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追邃2015

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-14 14:32:14
你到现在总共进行了几次测序？是挑不同的转化子测序还是挑同一个反复测序？这几次的测序结果一致还是每次的结果无论序列还是大小都不一样？...

总共测了3次，不同的菌落测序，并且测序结果都不一样...........
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23楼2014-06-14 21:26:10
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追邃2015

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
21楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-14 14:30:30
1.LZ你现在最关键的问题是你的T载体到底连上了多大的序列。你的菌落PCR验证大小是600左右，但是送去测序的结果除去载体前后50bp也有将近1200的大小。到底是测序公司把别人的结果弄成你的了还是你的菌落PCR验证不可 ...

谢谢！！！
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24楼2014-06-14 21:27:16
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