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请问我的菌落PCR测序产物目的片段是什么 已有4人参与
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请问我的菌落PCR测序产物是如下片段，用的M13引物，pMD-19 vector，因为我设计的引物是简并引物，所以序列里边找不到，想问谁知道我的目的片段怎么找，以及是什么？谢谢？ 引物如下：F 5' CATSGANTGGGGTGTHAT 3' R5' GTGRAGAATRCTCTTGWACT3' 以下是测序结果：CGATGGTAGCGCGGATCTTCAGAGATTACTGTTCTCCCGGCCTCAAATAACCCATCAATTATGATGCTGTATAAAATAGCTGAAGGCTTTATTCCCCTCTGCAGCATTTCTCTGAAAAGACTCAATCCTTCATCAATCCTTCCAATTTTACAATAGCCATTAACAAGTGTACAATACACTACAACGTTTGGTTCAATGCCAGCTGACACCATAGCATCAAATACTCTTAATGCTTTCTCCATCTTGCCAACAAGACAGTACCCATCCATCAGCATACTATACACCACAGCATCAGGATGCTGACCAGCATTTACAGTTAAGTCAAATATATTTTGTGCGTCCATTATCCTTCCCAGTTTGCAAAGGTTGTTAATTATCGAACTGAAGAAAACAATATCAAGACGCATGCCATTATTCATTATTTCCAAAATCAATTCCTTGGCTTTCAGTAAACTACCATGAGTACAAAAACCTTGAATCAGGCAATGGTATGCATATTTATCAGGTGCTACTCCTTGATCAATCATCTGATTAAATTTCTCCATAGCATCATCCATCTTACCGATTCTGCAGAGGGCAGCAATCACTGACGTATAGGTCACCACATCAGGTTTCACTCCATGGTCTCTCATTTCATTGAAGATGATCATAGCCTTATCTAGCATTCCACAGTTTGCATATGCCTTGATCAGCACACTAAAAGTATAAATGTCAGGTGCAATACCGTCACCTAGCATCAAATCGAAGAGATCTGTCATATCAACTAGACATCCTTTAGTGGCGTACCCGTTGAGCATAATTTTGTAGGAGAAAACATCAGGATTTTGGCCCTTCATTGCCATTGTGTCAAAAACATCTCTAGCTTCCTTGATTTTTCCATACTTGCAAAGGGAACCCATCAACATGTTAAAAGTAACAACATCTGGTAAGATGCTCTGTCTTCTCATTTCTTTAAATACCCTAACTGCCTCCTTCCACTGTCCTGTGGAGGAGTATCCATATATCAAGTTATTATATGTCCAGTTATTTGGCAGACACTTTATTGACATTTGTCGAAGAAAGCCTCTGCTGTCCATTGCTCTGCTTACCAGGCATGATCACAGAGCTATAGTCAACAAATCAGTGATACCCGGCTGTACATTTCTTTGAATAGATCCAATGCTTATTACGTTCACCTCCTTAGAGCGTCGATTACGTATGTAGCACCACGTTCGGGAACGAACGTTCCCCACG |
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2014-06-12 13:43:17, 1.2 K
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luwei13566
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【答案】应助回帖
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追邃2015(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-13 16:31:59
追邃2015(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-13 16:31:59
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1.因为你这个引物是简并引物，所以你扩增出的基因两端序列其实你还是不清楚的。所以你连上T载体需要用通用引物去验证。pmD-19T的公司测序就是用的M13R/F引物扩增的。做菌落PCR M13R/F也是可以的。你的模板是cDNA还是基因组，要克隆的序列大小知道吗？从你的测序结果看，我感觉测的还是你插入核酸的序列。先确认下测序编号是不是你的，如果送质粒测序还是这个结果的话，那你的模板再确认下吧。 2.一般如果序列比较明确的话，就不需要简并引物，直接用特异性引物扩增就好了，连上T载体也是用你克隆的引物验证就没问题了。 |
追邃2015
17楼2014-06-13 14:54:07
liug268
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2楼2014-06-12 14:31:50
3楼2014-06-12 14:51:50
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