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沙伯略

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[求助] Caco-2培养在Transwell里面电阻值长到很大之后,又开始降低,为什么? 已有2人参与

养过Caco-2并接种过Transwel的战友,请帮帮我~~~如题,我把Caco-2细胞以2*10^5/ml的密度接种到Transwell培养板(每个transwel板接种0.5ml,Corning3460,孔径0.4um,直径12mm),第1、3、5、7、11、17、19、21天测量跨膜电阻抗值。。。发现电阻值在第11天已达到1500Ω,但是,之后,随着培养时间的增加,第17、19、21天,电阻值又开始降低,一直从1500降到1200,又讲到900多,有的甚至降到500多。请问老师们:这是由于接种浓度过大导致的吗?还是由于有污染呢?还是由于其它的原因呢???
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绿色杯子

银虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by 沙伯略 at 2014-06-13 22:24:54
电阻计用的是milipore的,比较小,所以一直放在超净工作台里面的,每次使用之前照紫外,而且用75%乙醇浸泡电极15min了,应该没问题,并且,是某几个孔的电阻先下降,后来的都下降了,之后一般达到500-700Ω,又开始 ...

1.你的孔板更换了吗?我用的24孔板,换液的时候连板也换掉的。下室里容易长菌,那种团块状的,染菌的孔电阻值很低,就那种1,2,300的样子。
2.我换液不用枪的,用玻璃的那种巴斯管,这个换液的时候冲击力比较小。保证没有把膜弄破的话,你那个板子多大的呢?我用的底面积0.33cm2的transwell就是可以挂到24孔板上的,换液上室大约400ul,下室1ml。接种密度1~2*10^5.你换液是每天换还是隔天换的?是不是你的细胞太多,培养液不够用啊?换液的时候培养基什么色的啊?
9楼2014-06-14 20:01:53
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绿色杯子

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
沙伯略: 金币+19, ★★★很有帮助 2014-06-13 22:15:19
是不是你换液的时候把底部长的细胞单层膜弄坏了?细胞太多的话会爬到transwell的壁上
培养液隔天换的话什么颜色?换液的时候有浓重的怪味吗?
4楼2014-06-13 10:55:55
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沙伯略

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13楼: Originally posted by feizaiyey at 2014-06-25 10:02:41
楼组,我记得你之前的TEER很低,请问下你是如何提高你的TEER的啊~~~

换了一株细胞就上去了,估计是上次那株细胞的代数太靠后了~
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14楼2014-06-25 23:22:34
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普通回帖

沙伯略

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大虫们请不吝赐教啊!!!
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2楼2014-06-10 23:14:53
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liupeng0215

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

你后面换液怎么换的啊

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2014-06-13 10:03:55
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绿色杯子

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
沙伯略: 金币+17, ★★★很有帮助 2014-06-13 22:19:55
对了,还有你的电阻计保证无菌吗?因为我以前养的时候被染菌过,就是因为电阻计染菌,然后一个多月浪费掉
5楼2014-06-13 10:59:59
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沙伯略

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4楼: Originally posted by 绿色杯子 at 2014-06-13 10:55:55
是不是你换液的时候把底部长的细胞单层膜弄坏了?细胞太多的话会爬到transwell的壁上
培养液隔天换的话什么颜色?换液的时候有浓重的怪味吗?

您好,首先多谢您的回复!换液的时候,下室1.5lm,我换了1ml。上室0.5ml,我用200ul的枪头换取两次共计0.4ml培养液。每次都小心翼翼的,因此我排除是枪头把单层膜弄坏的情况。现在怀疑是接种密度太大的缘故,不知道你意下如何?(我的接种浓度是4*10^5个/ml)
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6楼2014-06-13 22:19:21
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沙伯略

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引用回帖:
5楼: Originally posted by 绿色杯子 at 2014-06-13 10:59:59
对了,还有你的电阻计保证无菌吗?因为我以前养的时候被染菌过,就是因为电阻计染菌,然后一个多月浪费掉

电阻计用的是milipore的,比较小,所以一直放在超净工作台里面的,每次使用之前照紫外,而且用75%乙醇浸泡电极15min了,应该没问题,并且,是某几个孔的电阻先下降,后来的都下降了,之后一般达到500-700Ω,又开始慢慢的升,但上升后一般不超过1000Ω,远未恢复到之前最高的1800Ω左右。如果是污染,应该是急剧下降,至零吧?当然,也有的孔一直讲到零(减去空白得到的值)。不知道大侠还有其他的原因没?
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7楼2014-06-13 22:24:54
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沙伯略

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3楼: Originally posted by liupeng0215 at 2014-06-13 10:03:55
你后面换液怎么换的啊

部分换液~
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8楼2014-06-13 22:25:42
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沙伯略

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引用回帖:
9楼: Originally posted by 绿色杯子 at 2014-06-14 20:01:53
1.你的孔板更换了吗?我用的24孔板,换液的时候连板也换掉的。下室里容易长菌,那种团块状的,染菌的孔电阻值很低,就那种1,2,300的样子。
2.我换液不用枪的,用玻璃的那种巴斯管,这个换液的时候冲击力比较小。 ...

我用的是12孔板,Corning3460,孔径0.4um,直径12mm。上室0.5ml,下室1.5ml。可是我找不到长菌的理由啊~电阻仪一直在超净台内,每次用之前75%乙醇浸泡擦拭。换也是每天换的~电阻比较小的孔,培养基确实明显比其他的孔更黄~
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10楼2014-06-15 23:36:44
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