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wkzhangchi

新虫 (初入文坛)

[求助] K562细胞转染,效率太低,如何解决? 已有1人参与

构建了一个pEGFP-C2的重组质粒,转染两种不同的细胞,发现293T效果较好,但是K562效果很差。各位大侠们有没有做过K562转染的,怎样才能提高转染效率呢?
附件是我的实验记录,一言难尽,只能全部贴出来了。
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  • 附件 1 : K562细胞转染实验记录效果图.doc
  • 2014-06-09 15:49:45, 25 M

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liug268

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wkzhangchi: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-10 14:51:33
您好,我一直在做K562细胞的转染。
这种细胞想用脂质体转是基本不太可能了,推荐电转。电转的话推荐Lonza的试剂盒,效率大概在40%左右。
除了电转之外,提质粒的时候注意除内毒素,提取后用滤膜滤一下。
2楼2014-06-10 11:58:28
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wkzhangchi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liug268 at 2014-06-10 11:58:28
您好,我一直在做K562细胞的转染。
这种细胞想用脂质体转是基本不太可能了,推荐电转。电转的话推荐Lonza的试剂盒,效率大概在40%左右。
除了电转之外,提质粒的时候注意除内毒素,提取后用滤膜滤一下。

非脂质体也没试过么?我第二次用的转染试剂是非脂质体试剂,说明书上也有转该细胞的,可惜我做出来的效率低。lonza试剂盒能更具体点么Nucleofector™ Kits for Cell Lines?这里面有好多产品呢
3楼2014-06-10 14:51:09
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haofeng0804

木虫 (著名写手)

包装病毒感染
4楼2014-06-10 22:52:45
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liug268

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励热心回帖交流 2014-06-11 19:03:54
引用回帖:
3楼: Originally posted by wkzhangchi at 2014-06-10 14:51:09
非脂质体也没试过么?我第二次用的转染试剂是非脂质体试剂,说明书上也有转该细胞的,可惜我做出来的效率低。lonza试剂盒能更具体点么Nucleofector™ Kits for Cell Lines?这里面有好多产品呢...

附件中是那个试剂盒的说明书。
非脂质体转染试剂没试过,你也懂的,lipo2000不行之后直接骗老板钱用最好的啊
这个试剂盒比较贵,还有就是必须用特定的转染仪。不过我觉得用普通电转仪优化一下也应该可以的。
祝你实验顺利

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  • 附件 1 : K562转染.pdf
  • 2014-06-11 09:01:38, 205.2 K
5楼2014-06-11 09:02:36
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ysk1989

新虫 (小有名气)


推荐英格恩生物的转染试剂,纳米聚合物材料,效果远远高于脂质体转染。并且可以加一定量的抗生素和血清,如果细胞状态好,不需要换液。
6楼2016-07-28 11:42:36
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Explor

新虫 (正式写手)

不知道楼主解决了没有,我知道国产BIODAI的RFect试剂盒,将你的详细情况列出来,在线销售会推荐最佳的转染试剂,K562细胞也没问题的。
个性化基因研究、科研试剂、诊断试剂和实验服务
7楼2019-11-20 10:17:59
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ddtao

新虫 (小有名气)


免费试用
8楼2019-12-06 19:48:26
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