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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » K562细胞转染，效率太低，如何解决？
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wkzhangchi

新虫 (初入文坛)

[求助] K562细胞转染，效率太低，如何解决？ 已有1人参与

构建了一个pEGFP-C2的重组质粒，转染两种不同的细胞，发现293T效果较好，但是K562效果很差。各位大侠们有没有做过K562转染的，怎样才能提高转染效率呢？
附件是我的实验记录，一言难尽，只能全部贴出来了。
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  • 附件 1 : K562细胞转染实验记录效果图.doc
    • 2014-06-09 15:49:45, 25 M

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1楼 2014-06-09 16:03:47
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wkzhangchi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liug268 at 2014-06-10 11:58:28
您好，我一直在做K562细胞的转染。
这种细胞想用脂质体转是基本不太可能了，推荐电转。电转的话推荐Lonza的试剂盒，效率大概在40%左右。
除了电转之外，提质粒的时候注意除内毒素，提取后用滤膜滤一下。

非脂质体也没试过么？我第二次用的转染试剂是非脂质体试剂，说明书上也有转该细胞的，可惜我做出来的效率低。lonza试剂盒能更具体点么Nucleofector™ Kits for Cell Lines？这里面有好多产品呢
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3楼2014-06-10 14:51:09
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liug268

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wkzhangchi: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-10 14:51:33
您好，我一直在做K562细胞的转染。
这种细胞想用脂质体转是基本不太可能了，推荐电转。电转的话推荐Lonza的试剂盒，效率大概在40%左右。
除了电转之外，提质粒的时候注意除内毒素，提取后用滤膜滤一下。
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2楼2014-06-10 11:58:28
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liug268

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励热心回帖交流 2014-06-11 19:03:54
引用回帖:
3楼: Originally posted by wkzhangchi at 2014-06-10 14:51:09
非脂质体也没试过么？我第二次用的转染试剂是非脂质体试剂，说明书上也有转该细胞的，可惜我做出来的效率低。lonza试剂盒能更具体点么Nucleofector™ Kits for Cell Lines？这里面有好多产品呢...

附件中是那个试剂盒的说明书。
非脂质体转染试剂没试过，你也懂的，lipo2000不行之后直接骗老板钱用最好的啊
这个试剂盒比较贵，还有就是必须用特定的转染仪。不过我觉得用普通电转仪优化一下也应该可以的。
祝你实验顺利
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  • 附件 1 : K562转染.pdf
    • 2014-06-11 09:01:38, 205.2 K
5楼2014-06-11 09:02:36
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ysk1989

新虫 (小有名气)
推荐英格恩生物的转染试剂，纳米聚合物材料，效果远远高于脂质体转染。并且可以加一定量的抗生素和血清，如果细胞状态好，不需要换液。
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6楼2016-07-28 11:42:36
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