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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 脱盐纯化
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冰雨@@雾晴

银虫 (小有名气)

[求助] 脱盐纯化 已有6人参与

大侠们好：
       我目前要做一个实验，反应步骤是这样的：第一步反应结束后，用PBS过G-25脱盐，进行纯化。但是现在实验室没有AKTA纯化设备，我要怎么操作呀，有没有有经验的大侠，提供一些参考。
      谢谢大家！
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选中一个目标，坚持不懈的走下去！
1楼 2014-06-09 10:28:23
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人觉得，你要做的第一步就是问问旁边哪个实验室或者哪个学校、单位有AKAT！
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2楼2014-06-09 11:15:56
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-06-09 15:41:27
不过柱的话可以用PBS透析，买点透析带~
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3楼2014-06-09 12:16:23
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有没有泵和紫外检测器？？有的话也可以做。
每次上样10-15%柱体积样品。分开收集就可以了。
一般蛋白有紫外吸收峰在35-60%柱体积，看情况吧。祝你好运。
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4楼2014-06-09 17:48:38
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寂静之林

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
脱盐纯化，其实很简单的，不一定要用到分子筛，可以考虑一下超滤，或者更简单的透析。
超滤的话，要有一台低温高速离心机（可以2-8℃离心10000rpm以上），然后挑选合适孔径带滤膜的离心管就，超滤5-6次就可以了，滤膜的孔径根据你蛋白的分子量大小来决定；
透析的话，需要的设备就更简单了，烧杯、搅拌设备，把蛋白装进透析袋里，扎紧之后，用PBS来搅拌透析，大概1小时换一次PBS，换几次就可以了，如果蛋白在室温不太稳定的话，还可以放到冰箱里去透析。透析袋孔径的大小，同样根据你蛋白的分子量大小来决定。
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5楼2014-06-09 17:51:05
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冰雨@@雾晴

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-09 17:48:38
有没有泵和紫外检测器？？有的话也可以做。
每次上样10-15%柱体积样品。分开收集就可以了。
一般蛋白有紫外吸收峰在35-60%柱体积，看情况吧。祝你好运。

谢谢！
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6楼2014-06-09 21:12:44
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冰雨@@雾晴

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 寂静之林 at 2014-06-09 17:51:05
脱盐纯化，其实很简单的，不一定要用到分子筛，可以考虑一下超滤，或者更简单的透析。
超滤的话，要有一台低温高速离心机（可以2-8℃离心10000rpm以上），然后挑选合适孔径带滤膜的离心管就，超滤5-6次就可以了，滤 ...

先谢谢！关键是我要更换BUFFER，用超滤的话可以做到吗？
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7楼2014-06-09 21:13:27
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寂静之林

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 冰雨@@雾晴 at 2014-06-09 21:13:27
先谢谢！关键是我要更换BUFFER，用超滤的话可以做到吗？...

超滤也可以做到的。
带滤膜的离心管，在离心的过程中，蛋白分子会被截留下来，小分子杂质和液体会被带走，然后再加入你需要的缓冲液，继续离心5-6次，这时候蛋白所处的缓冲体系就是你后面加入的缓冲液，这样就更换了Buffer啦，如果你还要换别的Buffer，那就继续离心了。
我在工作中，经常会需要对蛋白进行标记，都是用超滤的方法来处理蛋白分子的，目的就是：1、脱盐纯化，去掉蛋白溶液里的各种防腐剂、盐类；2、更换缓冲液，让蛋白在合适的pH体系里跟我的标记物进行反应。
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8楼2014-06-10 22:04:08
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爨乡主人

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用透析袋，也可以用millipore的超滤管，只要有离心机就能用。
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9楼2014-06-11 19:46:32
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蠕动泵加上检测器就可以了
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10楼2014-06-11 21:15:14
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