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冰雨@@雾晴

银虫 (小有名气)

[求助] 脱盐纯化 已有6人参与

大侠们好:
       我目前要做一个实验,反应步骤是这样的:第一步反应结束后,用PBS过G-25脱盐,进行纯化。但是现在实验室没有AKTA纯化设备,我要怎么操作呀,有没有有经验的大侠,提供一些参考。
      谢谢大家!
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寂静之林

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 冰雨@@雾晴 at 2014-06-09 21:13:27
先谢谢!关键是我要更换BUFFER,用超滤的话可以做到吗?...

超滤也可以做到的。
带滤膜的离心管,在离心的过程中,蛋白分子会被截留下来,小分子杂质和液体会被带走,然后再加入你需要的缓冲液,继续离心5-6次,这时候蛋白所处的缓冲体系就是你后面加入的缓冲液,这样就更换了Buffer啦,如果你还要换别的Buffer,那就继续离心了。
我在工作中,经常会需要对蛋白进行标记,都是用超滤的方法来处理蛋白分子的,目的就是:1、脱盐纯化,去掉蛋白溶液里的各种防腐剂、盐类;2、更换缓冲液,让蛋白在合适的pH体系里跟我的标记物进行反应。
8楼2014-06-10 22:04:08
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人觉得,你要做的第一步就是问问旁边哪个实验室或者哪个学校、单位有AKAT!
2楼2014-06-09 11:15:56
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
youlinglyw: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-06-09 15:41:27
不过柱的话可以用PBS透析,买点透析带~
3楼2014-06-09 12:16:23
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有没有泵和紫外检测器??有的话也可以做。
每次上样10-15%柱体积样品。分开收集就可以了。
一般蛋白有紫外吸收峰在35-60%柱体积,看情况吧。祝你好运。
4楼2014-06-09 17:48:38
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