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冰雨@@雾晴

银虫 (小有名气)

[求助] 脱盐纯化 已有6人参与

大侠们好:
       我目前要做一个实验,反应步骤是这样的:第一步反应结束后,用PBS过G-25脱盐,进行纯化。但是现在实验室没有AKTA纯化设备,我要怎么操作呀,有没有有经验的大侠,提供一些参考。
      谢谢大家!
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寂静之林

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
脱盐纯化,其实很简单的,不一定要用到分子筛,可以考虑一下超滤,或者更简单的透析。
超滤的话,要有一台低温高速离心机(可以2-8℃离心10000rpm以上),然后挑选合适孔径带滤膜的离心管就,超滤5-6次就可以了,滤膜的孔径根据你蛋白的分子量大小来决定;
透析的话,需要的设备就更简单了,烧杯、搅拌设备,把蛋白装进透析袋里,扎紧之后,用PBS来搅拌透析,大概1小时换一次PBS,换几次就可以了,如果蛋白在室温不太稳定的话,还可以放到冰箱里去透析。透析袋孔径的大小,同样根据你蛋白的分子量大小来决定。
5楼2014-06-09 17:51:05
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人觉得,你要做的第一步就是问问旁边哪个实验室或者哪个学校、单位有AKAT!
2楼2014-06-09 11:15:56
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
youlinglyw: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-06-09 15:41:27
不过柱的话可以用PBS透析,买点透析带~
3楼2014-06-09 12:16:23
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有没有泵和紫外检测器??有的话也可以做。
每次上样10-15%柱体积样品。分开收集就可以了。
一般蛋白有紫外吸收峰在35-60%柱体积,看情况吧。祝你好运。
4楼2014-06-09 17:48:38
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