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karuirui

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR阴性对照出条带,但是内参没有,换了一管新的引物还是有条带 已有4人参与

请教各位大神,PCR阴性对照(没有cDNA,只有引物、水、taq酶)出条带,而且大小正好是我的目的基因大小,循环32圈,但是内参的阴性没有条带,这是为什么呢!以为是引物被污染了,但是换了一管新的,还是有目的条带!
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karuirui

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 紫月清风2012 at 2014-07-08 19:23:45
您好,我也遇到了同样的问题,想问一下您的这个问题解决了吗?您是怎样解决的?达到了您预期的效果吗?

我重新设计了引物。因为我把循环圈数降到了32,阴性还是有条带,而且引物换了纯化方式重新合成后还是有,我就想可能是引物自身设计有问题吧。
18楼2014-07-11 13:28:44
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youlinglyw

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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karuirui(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-06-08 20:50:15
水或试剂被污染了
或者是你记错了

一般这种情况,阴性出来肯定不正常,除非你的片段刚好100bp左右,跟引物二聚体大小差不多,这种情况也存在。

建议把所有试剂换了重新做一边,如果还出来,极有可能是二聚体
天行健
2楼2014-06-08 17:26:04
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karuirui

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-08 17:26:04
水或试剂被污染了
或者是你记错了

一般这种情况,阴性出来肯定不正常,除非你的片段刚好100bp左右,跟引物二聚体大小差不多,这种情况也存在。

建议把所有试剂换了重新做一边,如果还出来,极有可能是二聚体

我所的东西都换了,包括水……还是有。目的条带的大小是二百多。
3楼2014-06-09 10:52:29
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youlinglyw

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一匡天下

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引用回帖:
3楼: Originally posted by karuirui at 2014-06-09 10:52:29
我所的东西都换了,包括水……还是有。目的条带的大小是二百多。...

神了个奇,难道你的引物被污染了?这个很少见啊,你试一下,换组其他引物来扩增你的cDNA,如果依然可以扩增出来200bp,额,见鬼了
天行健
4楼2014-06-09 11:41:26
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