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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR阴性对照出条带，但是内参没有，换了一管新的引物还是有条带
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karuirui

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR阴性对照出条带，但是内参没有，换了一管新的引物还是有条带 已有4人参与

请教各位大神，PCR阴性对照（没有cDNA，只有引物、水、taq酶）出条带，而且大小正好是我的目的基因大小，循环32圈，但是内参的阴性没有条带，这是为什么呢！以为是引物被污染了，但是换了一管新的，还是有目的条带！
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1楼 2014-06-08 16:52:06
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 15:38:13
很可能是你的微量移液器没有过滤膜，也没有消毒棉在微量移液器的杆身与接头之间形成阻塞，导致你在使用微量移液器吸取目的cDNA样品液时形成了目的cDNA气雾胶，而且cDNA气雾胶肯定会残留在微量移液器的杆身里，这样换了吸管（“枪头”）也会有cDNA样品液污染。如此cDNA样品液会随着下次加样而进入阴性实验体系，所以阴性对照实验有目的条带出现。
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13楼2014-07-09 02:26:49
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
karuirui(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-06-08 20:50:15
水或试剂被污染了
或者是你记错了

一般这种情况，阴性出来肯定不正常，除非你的片段刚好100bp左右，跟引物二聚体大小差不多，这种情况也存在。

建议把所有试剂换了重新做一边，如果还出来，极有可能是二聚体
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天行健
2楼2014-06-08 17:26:04
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karuirui

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-08 17:26:04
水或试剂被污染了
或者是你记错了

一般这种情况，阴性出来肯定不正常，除非你的片段刚好100bp左右，跟引物二聚体大小差不多，这种情况也存在。

建议把所有试剂换了重新做一边，如果还出来，极有可能是二聚体

我所的东西都换了，包括水……还是有。目的条带的大小是二百多。
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3楼2014-06-09 10:52:29
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by karuirui at 2014-06-09 10:52:29
我所的东西都换了，包括水……还是有。目的条带的大小是二百多。...

神了个奇，难道你的引物被污染了？这个很少见啊，你试一下，换组其他引物来扩增你的cDNA,如果依然可以扩增出来200bp，额，见鬼了
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天行健
4楼2014-06-09 11:41:26
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