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o茜茜o

新虫 (初入文坛)

[求助] 提转化后的Rosetta质粒时只提出两条带,也没有表达 已有4人参与

将我的质粒转入Rosetta后提质粒验证
但是总是只提出两条带
有点像从BL21里提出来的
而且也表达不出来
纠结了好久了,求大神帮忙
PS:我确定转的是Rosetta
       而且在Cl 以及Ap(转入的质粒的抗性)抗性中能生长
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biology-girl

新虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-06 19:10:50
是的 rosseta 本身含有质粒的,建议你做菌落PCR 验证。
4楼2014-06-06 15:54:28
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

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o茜茜o(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-06 19:10:29
Rosetta是表达菌株,一般表达菌株endA1都是没有敲除的,所以是不适合从表达菌株里面提取质粒的
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-06-06 15:28:14
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

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o茜茜o(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-06 19:10:39
Rosetta 自带一个含有表达氯霉素抗性基因的质粒,所以做酶切没有什么意义,就算切出来了,结果也不见得可信。
所以还是PCR来的方便,可信。
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
3楼2014-06-06 15:34:17
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-06 19:10:58
质粒只要构建的没有问题,几条带不是重点吧,应该把重点放在表达条件的优化上。

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-06-06 17:30:27
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