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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提转化后的Rosetta质粒时只提出两条带，也没有表达
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o茜茜o

新虫 (初入文坛)

[求助] 提转化后的Rosetta质粒时只提出两条带，也没有表达 已有4人参与

将我的质粒转入Rosetta后提质粒验证
但是总是只提出两条带
有点像从BL21里提出来的
而且也表达不出来
纠结了好久了，求大神帮忙
PS：我确定转的是Rosetta
       而且在Cl 以及Ap（转入的质粒的抗性）抗性中能生长
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1楼 2014-06-06 15:20:30
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

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o茜茜o(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-06 19:10:29
Rosetta是表达菌株，一般表达菌株endA1都是没有敲除的，所以是不适合从表达菌株里面提取质粒的
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2楼2014-06-06 15:28:14
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

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o茜茜o(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-06 19:10:39
Rosetta 自带一个含有表达氯霉素抗性基因的质粒，所以做酶切没有什么意义，就算切出来了，结果也不见得可信。
所以还是PCR来的方便，可信。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
3楼2014-06-06 15:34:17
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biology-girl

新虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-06 19:10:50
是的 rosseta 本身含有质粒的，建议你做菌落PCR 验证。
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4楼2014-06-06 15:54:28
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Neo2000

木虫 (著名写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-06 19:10:58
质粒只要构建的没有问题，几条带不是重点吧，应该把重点放在表达条件的优化上。

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5楼2014-06-06 17:30:27
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o茜茜o

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-06 15:28:14
Rosetta是表达菌株，一般表达菌株endA1都是没有敲除的，所以是不适合从表达菌株里面提取质粒的

重点不是适不适合提质粒，而是我提出来的条带不对
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6楼2014-06-09 00:47:14
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