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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请问在细胞外面有mRNA吗？
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请问在细胞外面有mRNA吗？ 已有5人参与

做了一个基因在细胞中的表达量测定，收细胞时用PBS冲洗细胞三次，并将第三次的洗脱液收集起来，然后对所收集的细胞和第三次的洗脱液提RNA，反转录后进行表达量测定，结果发现洗脱液中也有该基因的表达量，而且也不低。。。所以现在我不确定是不是细胞外也会存在mRNA呢？   请教各位了~~~谢谢大家~~~
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
1楼 2014-05-31 18:49:09
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
就目前的人类的生物学科的理论认识水平，这里还是一个，往上抛一个苹果，不见得会落地，说不定会飞向月亮的世界。任何事情都有可能发生，比如细胞外有点什么RNA，很有可能啊，问题是你要用“科学”的方法得出这个结论才行。
PBS洗洗细胞，细胞有点破了，RNA释放出了有污染这是肯定存在的，或者，培养基里面的血清成分残留也是有可能的。至于PCR是否操作上还有点问题，那就是你的事情了。如果你发现了一个惊天动地的事情，现在你要做的就是，如果让世人接受，设计一点合理且严谨的实验吧。
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19楼2014-06-01 23:44:58
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-31 21:55:13
你那不像是细胞外液中存在mRNA。
你PBS洗了3遍，收集的是第3遍，而且还表达量不低。
我们的话，叫做H2O都P出条带了。重新实验，把能换的都换了。我们实验室就有人把酶都污染了，然后一直是H2O都P出条带。
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2楼2014-05-31 18:55:11
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by BioChen at 2014-05-31 18:55:11
你那不像是细胞外液中存在mRNA。
你PBS洗了3遍，收集的是第3遍，而且还表达量不低。
我们的话，叫做H2O都P出条带了。重新实验，把能换的都换了。我们实验室就有人把酶都污染了，然后一直是H2O都P出条带。

我用的荧光定量测定它的表达量，测出来洗脱液中和细胞中的表达量基本就差不多，我明白你说的意思，你是说洗脱液中还有目的基因，所以就会P出条带。但是用荧光定量分析的话洗脱液中的基因含量再高他也不应该比细胞中的基因含量高吧？所以我很费解。。。
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
3楼2014-05-31 20:49:14
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BioChen

银虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-31 22:44:45
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaohaixie at 2014-05-31 20:49:14
我用的荧光定量测定它的表达量，测出来洗脱液中和细胞中的表达量基本就差不多，我明白你说的意思，你是说洗脱液中还有目的基因，所以就会P出条带。但是用荧光定量分析的话洗脱液中的基因含量再高他也不应该比细胞中 ...

按照你这样的流程，洗脱液里面是不太可能有mRNA。而且洗脱液反转录后，做实时定量和细胞中差不多，这就更不可能了啊。
建议你检查实验过程，是不是污染了。
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4楼2014-05-31 20:52:59
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