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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RACE实验
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

[求助] RACE实验 已有1人参与

大家好，最近做RACE遇到一个问题，想请教下高手
有个基因5'RACE割胶回收长度2000bp左右，连接转化，菌液PCR的条带大小只有1000bp不到，测序结果表明是目的基因，但是蛋NCBI蛋白比对这个基因编码的首个氨基酸位于其他物种100-200个氨基酸位置。
测序结果都能找到5RACE试剂盒引物和我设计的特异引物。
我用的是PMD18-T,天根的大肠杆菌感受态。
这是什么原因呢？
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1楼 2014-05-29 10:00:31
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shiliyusly: 金币+2 2014-05-29 19:50:00
回收条带不纯，小带干扰了后续克隆

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2楼2014-05-29 10:51:51
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shiliyusly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-29 10:51:51
回收条带不纯，小带干扰了后续克隆

谢谢你的解答。可是割胶后的电泳条带基本看不出有杂带的。
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3楼2014-05-29 19:49:53
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by shiliyusly at 2014-05-29 19:49:53
谢谢你的解答。可是割胶后的电泳条带基本看不出有杂带的。...

那个是看不出来的

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4楼2014-05-29 20:11:37
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