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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞冻存有遇到过这些问题吗？
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随游

木虫 (正式写手)
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49楼: Originally posted by hbl215 at 2014-05-29 08:06:25
你冻存管中细胞体积很多么，一般是0.8至1.0ml，1分钟内是没问题的。融到黄豆粒大小后再移管到超净台，这期间拿手握管，手有温度的，期间一直晃管。过火前就可以融掉。我说的黄豆粒是比绿豆大一点的大小啊，不是泡发 ...

用骨髓瘤细胞又做了一次实验，在-70℃放了10天，复苏后的状态比8天前入液氮的要好一点，但也不是特别好，长时间在-70℃保存不是长久之计；只在-70℃过夜的(9天前)转移到液氮后，复苏的状态又比-70℃放了10天的强。
貌似有点乱，似乎说明，-70℃过夜后转液氮最好，-70短时间较好，不易长期存放。
对了，液氮容易进入冻存管，这个貌似也有影响啊
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71楼2014-06-10 18:39:29
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CacaoPie

木虫 (小有名气)
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随游: 金币+2 2014-06-11 22:32:32
冻存的时候如果没有梯度冻存盒的话，建议先放到4度，在放到-20度然后再放到-70度，如果觉得细胞数少的话可以一次多复苏几管并在一起养。
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72楼2014-06-10 18:58:38
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爷就这么拽

银虫 (小有名气)
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随游: 金币+2 2014-06-11 22:31:13
你放到负八十的时候是直接把冻存管放进去吗？如果是那我建议你把冻存管用脱脂棉包起来让它缓慢降温，希望对你有帮助

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73楼2014-06-11 00:24:07
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随游

木虫 (正式写手)
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73楼: Originally posted by 爷就这么拽 at 2014-06-11 00:24:07
你放到负八十的时候是直接把冻存管放进去吗？如果是那我建议你把冻存管用脱脂棉包起来让它缓慢降温，希望对你有帮助

不是直接放进去的，是在充满泡沫的泡沫盒里面。棉花包着，多厚呢，这个和放到泡沫盒的比，区别大不？
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74楼2014-06-11 22:32:28
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随游

木虫 (正式写手)
引用回帖:
72楼: Originally posted by CacaoPie at 2014-06-10 18:58:38
冻存的时候如果没有梯度冻存盒的话，建议先放到4度，在放到-20度然后再放到-70度，如果觉得细胞数少的话可以一次多复苏几管并在一起养。

我之前试过4℃→-20℃→-70℃→液氮，和我这现在泡沫盒直接-70℃过夜再转液氮的效果差不多呢
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75楼2014-06-11 22:33:56
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爷就这么拽

银虫 (小有名气)
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74楼: Originally posted by 随游 at 2014-06-11 22:32:28
不是直接放进去的，是在充满泡沫的泡沫盒里面。棉花包着，多厚呢，这个和放到泡沫盒的比，区别大不？...

冻存细胞要缓慢降温，不要太快也不要太慢，如果太快那么细胞没会产生冰晶把细胞扎破，太慢的话细胞就会冻死了，我冻存Hela细胞包棉花，再复苏的时候基本没有死的，而且状态非常好。像你这种比较娇气的细胞我也没养过，我主要养基质细胞，没冻存过。我也不知道这种方法适不适合你，我觉得你那方法降温过程有点慢，你可以试一下包棉花。。

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76楼2014-06-12 00:08:39
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爷就这么拽

银虫 (小有名气)
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76楼: Originally posted by 爷就这么拽 at 2014-06-12 00:08:39
冻存细胞要缓慢降温，不要太快也不要太慢，如果太快那么细胞没会产生冰晶把细胞扎破，太慢的话细胞就会冻死了，我冻存Hela细胞包棉花，再复苏的时候基本没有死的，而且状态非常好。像你这种比较娇气的细胞我也没养 ...

包棉花也不用太厚，我用的脱脂棉包完相当于两个冻存管的厚度或者再厚一点。等它完全冻了就把棉花接下来就可以了

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77楼2014-06-12 00:10:53
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随游

木虫 (正式写手)
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77楼: Originally posted by 爷就这么拽 at 2014-06-12 00:10:53
包棉花也不用太厚，我用的脱脂棉包完相当于两个冻存管的厚度或者再厚一点。等它完全冻了就把棉花接下来就可以了
...

哦，那还是挺厚的。我冻存细胞的数目还是挺多的，感觉棉花麻烦了点，回头我试试，比较一下。
对了，你用的DMSO是什么牌子的，保质期是多久，有没有研究过它对细胞冻存的影响？
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78楼2014-06-12 16:47:19
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隆冬雪
79楼2014-06-16 08:47:21
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yipan

铜虫 (职业作家)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
随游: 金币+2, 问题是程序降温盒也不能解决根本问题啊，现在不能证明是降温环节出问题了啊 2014-06-18 21:52:20
使用程序降温盒不是很好解决吗？
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80楼2014-06-18 09:39:56
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