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随游

木虫 (正式写手)

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[交流] 细胞冻存有遇到过这些问题吗？

很多珍贵的细胞株，冻存后很难复苏，或者复苏后出现大量死亡，不知大家都是怎么处理的，是否解决了这些问题？
我先说说我最近遇到的问题吧。
培养物：杂交瘤细胞
冻存液：90%FBS+10%DMSO
冻存过程：(泡沫盒) -70℃过夜→转液氮保存
复苏过程：40℃水浴→90s内，溶解→1500 rpm，3 min→弃上清，培养基重悬→T75培养瓶培养，5% CO2,37℃，DMEM+20%FBS+双抗
问题：部分细胞复苏之后，大量死亡，有的甚至全部死亡；此类细胞中，部分细胞复苏起来后死的就很多，部分细胞过几个小时后死亡
作出的努力：1、在添加饲养细胞的24孔板内复苏，能抢救一部分，但耗时
2、冻存数目增加，占的位置太多，且仍然不能解决
3、试过不同的冻存液配方，FBS20%、50%、90%都没有明显的改善
最近一次发现，-70保存后复苏比液氮保存后复苏的效果要好很多，这说明我在转液氮的时候出问题了么？可是不是很明白会出啥问题呢~~
请大家都来说一说哈！

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1楼 2014-05-28 15:43:16

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爷就这么拽

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

74楼: Originally posted by 随游 at 2014-06-11 22:32:28
不是直接放进去的，是在充满泡沫的泡沫盒里面。棉花包着，多厚呢，这个和放到泡沫盒的比，区别大不？...

冻存细胞要缓慢降温，不要太快也不要太慢，如果太快那么细胞没会产生冰晶把细胞扎破，太慢的话细胞就会冻死了，我冻存Hela细胞包棉花，再复苏的时候基本没有死的，而且状态非常好。像你这种比较娇气的细胞我也没养过，我主要养基质细胞，没冻存过。我也不知道这种方法适不适合你，我觉得你那方法降温过程有点慢，你可以试一下包棉花。。

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