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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞冻存有遇到过这些问题吗？
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hbl215

金虫 (文坛精英)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
随游: 金币+5, 谢谢 2014-05-28 19:12:29
一般最好是用冻存罐进行冻存，没有的话，先4度10min（省去也差别不大），-20度2小时，然后再转移至-70，全程都是放在泡沫盒里。
复苏用38度，我觉得40度太高了，1分钟内融到剩黄豆粒大小，拿出。杂交瘤细胞比较大的，复苏的话，800rpm足够了，离心力大对于刚复苏比较脆弱的细胞伤害比较大。
你发现-70比液氮复苏效果要好，是不是仅限于一次比较，那没有说服力的，复苏的真个过程操作都有影响。
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41楼2014-05-28 16:54:11
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随游

木虫 (正式写手)
引用回帖:
41楼: Originally posted by hbl215 at 2014-05-28 16:54:11
一般最好是用冻存罐进行冻存，没有的话，先4度10min（省去也差别不大），-20度2小时，然后再转移至-70，全程都是放在泡沫盒里。
复苏用38度，我觉得40度太高了，1分钟内融到剩黄豆粒大小，拿出。杂交瘤细胞比较大的 ...

可是38度，要完全溶解的话需要的时间早就超过1分钟了，DMSO在这个温度对细胞的伤害还是很大的啊。
另外，还有黄豆大小的冰块就不溶解直接去离心了吗，这样对细胞没有伤害吗？话说我都是完全溶解了才去离心的哦。
我比较过几种杂交瘤细胞的离心转速，15000,3min，还好，问题不大，至少我的实验结果显示差不多的。
我做过2种杂交瘤细胞和一种骨髓瘤细胞，-70直接复苏的效果都还不错，只是，在-70里面放置的时间再一周以内，长时间的我没有试过。其实我做这个，就是为了找冻存细胞出问题的原因，长期保存，在液氮是最好的，-70只是短时间比较好。
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42楼2014-05-28 19:12:16
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xianzhi2010
43楼2014-05-28 19:46:15
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2981249
44楼2014-05-28 21:28:14
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其实不想卖

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
随游: 金币+3, 目前正在再次试验中，如果再试一次还是-70好，那可能就有问题了，但是老实说不知道有哪些可能呢 2014-05-29 12:49:36
你看看其他的杂交瘤有问题吗，若都有问题就是冻存的问题了。

我觉得复苏上是没有大的问题的。别说38度了，50度我也用过：）
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45楼2014-05-28 21:32:22
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燕绮

银虫 (正式写手)
我是来学习的
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46楼2014-05-29 00:02:51
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士
★
随游: 金币+1 2014-06-03 21:24:55
blessing
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蓝精灵
47楼2014-05-29 02:46:10
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gwolf
★
随游: 金币+1 2014-06-03 21:25:00
祝福
48楼2014-05-29 03:52:37
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hbl215

金虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
41楼: Originally posted by hbl215 at 2014-05-28 16:54:11
一般最好是用冻存罐进行冻存，没有的话，先4度10min（省去也差别不大），-20度2小时，然后再转移至-70，全程都是放在泡沫盒里。
复苏用38度，我觉得40度太高了，1分钟内融到剩黄豆粒大小，拿出。杂交瘤细胞比较大的 ...

你冻存管中细胞体积很多么，一般是0.8至1.0ml，1分钟内是没问题的。融到黄豆粒大小后再移管到超净台，这期间拿手握管，手有温度的，期间一直晃管。过火前就可以融掉。我说的黄豆粒是比绿豆大一点的大小啊，不是泡发那么大的啦。可以预先在离心管中加2ml培养基，细胞加进去后，再沿壁逐渐加到6/7m，这样可以让细胞逐渐适应更换的环境。你可以试一下。
至于是不是冻存的因素，若细胞富裕，可以做个对照试一下啊，直接-70冻存，短时间估计影响不大，放久一点就看出来了，我以前干过这事哈，短时间再复苏，看形貌看不出来，但对细胞的伤害肯定有的。

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49楼2014-05-29 08:06:25
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随游

木虫 (正式写手)
引用回帖:
49楼: Originally posted by hbl215 at 2014-05-29 08:06:25
你冻存管中细胞体积很多么，一般是0.8至1.0ml，1分钟内是没问题的。融到黄豆粒大小后再移管到超净台，这期间拿手握管，手有温度的，期间一直晃管。过火前就可以融掉。我说的黄豆粒是比绿豆大一点的大小啊，不是泡发 ...

体积不多呢，也就是0.8-1.2之间吧，我调到40℃，1分钟哈还是不能完全溶解，计时看过，但是达到你说的那个水准是可以的。你的意思就是复融之后加到培养基里面，再离心哈？我也做过，也参考过冷泉港的复苏步骤，但是做出来没多少区别呢。
我现在正在做，准备放个五六天转液氮，然后留些在-70，回头再一起复苏一次看看
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50楼2014-05-29 12:54:31
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