24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

随游

木虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1459
散金: 89
红花: 2
帖子: 312
在线: 136.6小时
虫号: 666688
注册: 2008-12-02
性别: MM
专业: 免疫生物学

[交流] 细胞冻存有遇到过这些问题吗？

很多珍贵的细胞株，冻存后很难复苏，或者复苏后出现大量死亡，不知大家都是怎么处理的，是否解决了这些问题？
我先说说我最近遇到的问题吧。
培养物：杂交瘤细胞
冻存液：90%FBS+10%DMSO
冻存过程：(泡沫盒) -70℃过夜→转液氮保存
复苏过程：40℃水浴→90s内，溶解→1500 rpm，3 min→弃上清，培养基重悬→T75培养瓶培养，5% CO2,37℃，DMEM+20%FBS+双抗
问题：部分细胞复苏之后，大量死亡，有的甚至全部死亡；此类细胞中，部分细胞复苏起来后死的就很多，部分细胞过几个小时后死亡
作出的努力：1、在添加饲养细胞的24孔板内复苏，能抢救一部分，但耗时
2、冻存数目增加，占的位置太多，且仍然不能解决
3、试过不同的冻存液配方，FBS20%、50%、90%都没有明显的改善
最近一次发现，-70保存后复苏比液氮保存后复苏的效果要好很多，这说明我在转液氮的时候出问题了么？可是不是很明白会出啥问题呢~~
请大家都来说一说哈！

回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Gary张

» 猜你喜欢

1楼 2014-05-28 15:43:16

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

随游

木虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1459
散金: 89
红花: 2
帖子: 312
在线: 136.6小时
虫号: 666688
注册: 2008-12-02
性别: MM
专业: 免疫生物学

引用回帖:

49楼: Originally posted by hbl215 at 2014-05-29 08:06:25
你冻存管中细胞体积很多么，一般是0.8至1.0ml，1分钟内是没问题的。融到黄豆粒大小后再移管到超净台，这期间拿手握管，手有温度的，期间一直晃管。过火前就可以融掉。我说的黄豆粒是比绿豆大一点的大小啊，不是泡发 ...

用骨髓瘤细胞又做了一次实验，在-70℃放了10天，复苏后的状态比8天前入液氮的要好一点，但也不是特别好，长时间在-70℃保存不是长久之计；只在-70℃过夜的(9天前)转移到液氮后，复苏的状态又比-70℃放了10天的强。
貌似有点乱，似乎说明，-70℃过夜后转液氮最好，-70短时间较好，不易长期存放。
对了，液氮容易进入冻存管，这个貌似也有影响啊