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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 天然生物材料 » 请教：酶活测定中的问题
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minrui0522

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 请教：酶活测定中的问题

请教各位大虫：
    酶活测定中为何要将酶液稀释不同的倍数？如何确定酶液的稀释倍数？

[ Last edited by zhangwj on 2008-12-20 at 01:57 ]
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1楼 2008-03-17 21:54:13
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tearfulfish33

铁杆木虫 (著名写手)

一条大河向东流
一般买的酶液肯定要稀释，浓度比较高，哪样和底物反应是过量的，测不到其最大酶活，但是自己做的有可能要稀释，或则浓缩，我一般都用DNS测花还原糖，如果浓度太大，紫外就测不出来了
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人生能有几回搏
3楼2008-04-04 20:41:56
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zhengao2006

将酶液稀释应该是为了防止酶的浓度太大,从而使底物的浓度相对减小,测得的酶活不是在百分之五内的酶活.稀释的倍数应该按照具体的试验而定,对于酶活较高的酶稀释倍数可以大一些,酶活低的就小些,甚至需要浓缩.
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2楼2008-04-03 23:58:43
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shine815

金虫 (正式写手)
我做过酶活性测定的相关工作。测i酶活应将酶进行梯度稀释，目的是为了绘制该种类酶的标准曲线。稀释倍数通常是依次稀释两倍，比如：使用300000U/ml标准溶菌酶依次2×（150000U/ml,75000U/ml.......）稀释。根据做出的标准曲线，再具体摸索稀释倍数。在不要求很精确的情况下，稀释两倍就可以了。个人经验，不恰当之处多多指正！
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我的道路我来走我的人生我做主
4楼2008-04-05 09:35:18
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yuxiaolin

金虫 (小有名气)
要用米氏方程进行拟合从而取出米氏常数和Vmax，前提是底物浓度是酶浓度的10倍以上，从而满足准一级反应的条件
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5楼2008-04-19 11:44:46
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